嗅鞘細胞分離有傳統分離法：嗅球置于少量ACSF（人工腦脊液）中(4℃冰浴)，在解剖顯微鏡下，將位于嗅球最外層的嗅神經層、嗅神經及包被的腦膜輕輕剝下，用ACSF洗2次，組織塊用0.125%胰酶(Sigma)37℃消化20min，經胰酶消化的組織塊再移至完全培養液(DMEM：胎牛血清=9：1美國GIBCO公司)中，用滴管輕輕吹打組織塊使之形成細胞懸液備用。分層消化法：整個嗅球置于0.125%胰酶中，37℃消化15min（不時搖動），取出含有細胞的酶液，終止酶反應。剩余的嗅球再用酶消化，重復以上操作6次，細胞懸液分別收集于6支小試管內備用。直接擠壓法：嗅球置于少量ACSF中，用眼科鑷子直接將嗅球撕爛、擠壓，將剩余的片狀組織塊轉移至另一試管內，用ACSF洗2次，組織塊用0.125%胰酶（Sigma）37℃消化20min，經胰酶消化的組織塊再移至完全培養液中，用滴管輕輕吹打組織塊使之形成細胞懸液。
傳統分離方法一般分為兩大類，一類是酶消化法，另一類是利用OECs對p75NGFR有特異免疫性的特點，采用免疫抗體包被培養瓶方法、磁珠懸浮法和流式細胞儀分離法將OECs分離。產量上，直接擠壓法最高，傳統分離法次之，分層消化法最低。傳統方法（包括免疫抗體包被培養瓶方法、磁珠懸浮法和流式細胞儀分離法）分離過程復雜，操作時間長，需要特殊儀器及器械，特別是含OECs豐富的嗅神經層非常薄，即使在解剖顯微鏡下也無法與其它組織區別，嗅神經更是難于找到，分離效果很差。直接擠壓法特點是操作簡單易行，省時，不需要特殊儀器設備，且在獲得細胞的數量上略多于傳統分離法。直接擠壓法優于傳統方法和分層消化法。為了加快OECs的增殖速度，提高產量可以在培養液中加入一些促進細胞分裂的物質，如在培養液中加入適量的牛垂體提取物（BPE）可使OECs增殖明顯加快，但因其它細胞增殖也加快，使其純度有所下降。應用Arac純化OECs方法簡便、經濟，OECs純度可達70%左右。時一步純化還可用Thy-1.1抗體殺死成纖維細胞，文獻[13]報道純度可達99%以上，其缺點是方法復雜、費用昂貴。
