檢查螺旋體
采取初期及二期梅毒硬性下疳、梅毒疹的滲出物等，用暗視野或墨汁顯影，如查見有運動活潑的密螺旋體即可診斷。
血清學檢查
1．非螺旋體抗原試驗：是用正常牛心肌的心類脂（Cardiolipin）作為抗原，檢測病人血清中的反應素。國際上常用性病研究實驗室（VDRL）的玻片試驗法；該法是一種簡單的玻片沉淀試驗，試劑及對照已標準化。另外，還可用不加熱血清反應素試驗（USR），其抗原是VDRL抗原的改良，敏感性和特異性與VDRL相似。反應素在第一期梅毒病變出現后1-2周就可測出，第二期陽性率幾乎達100，第三期陽性率較低。本試驗所用抗原是非特異的，檢測的抗體時應排除假陽性反應，結合病史，臨床表現及多次的試驗結果進行分析。
2．螺旋體抗原試驗：抗原為梅毒旋體，以檢測血清中的特異性抗體，該試驗特異性高，目前常用下述兩種方法。
⑴熒光密螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）：為間接熒光抗體法，其敏感性及特異性均高，常用于梅毒的早期診斷。
⑵梅毒螺旋體制運試驗（TPI）：用來檢測血清中是否存在抑制螺旋體活動的特異性抗體。用活梅毒螺旋體（Nichol株）加病人新鮮血清，35℃培養16小時，同法作正常血清對照，然后用暗視野顯微鏡觀察活動的螺旋體數目，如試驗標本活動的螺旋體數目小于或等于對照血清標本內的40%，即為陽性。