斐林試劑和雙縮脲試劑都由NaOH溶液（斐林試劑中還有酒石酸鉀鈉）和CuSO4溶液組成，但二者有如下三點不同：
（1）溶液濃度不同
CuSO4溶液稱為斐林試劑乙，其濃度為0.05 g/mL；
CuSO4溶液稱為雙縮脲試劑B，其濃度為0.01 g/mL。
（2）使用原理不同
斐林試劑是新配制的溶液，它在加熱條件下與醛基反應，被還原成磚紅色的沉淀，可用于鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍色→棕色→磚紅色（沉淀）。
鑒定生物組織中是否含有蛋白質時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發生的是雙縮脲反應。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。蛋白質的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡合成紫紅色的化合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。
（3）使用方法不同
斐林試劑使用時，先等體積混合甲、乙兩液，而后立即使用，反應需要加熱（有時不加熱也反應）；雙縮脲試劑使用時，先加入NaOH溶液（1mL），振蕩搖勻，造成堿性的反應環境，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，振蕩搖勻后觀察現象。