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  • 發布時間:2022-05-16 12:27 原文鏈接: 畢赤酵母表達系統的特點

    自從1987年Cregg等首次用巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)作為宿主表達外源蛋白以來,作為一種新的高效的表達系統,畢赤酵母越來越引起人們的重視,到1995年,已有四十多種外源蛋白在該宿主菌中獲得表達。而最近幾年每年報道的在畢赤酵母中表達的外源基因就有幾十種,且一年比一年多,與其它表達系統相比,畢赤酵母表達系統具有以下優勢:
    1)含有特有的強有力的AOX(醇氧化酶基因)啟動子,用甲醇可嚴格地調控外源基因的表達;
    2)表達水平高,即可在胞內表達,又可分泌型表達。畢赤酵母中,報道的最高表達量為破傷風毒素C為12g/l,一般大于1g/l。絕大多數外源基因比在細菌、釀酒酵母、動物細胞中表達水平高。一般畢赤酵母中外源基因都帶有指導分泌的信號肽序列,使表達的外源目的蛋白分泌到發酵液中,有利于分離純化;
    3)發酵工藝成熟,易放大。已經有大規模工業化高密度生產的發酵工藝,且細胞干重達100g/l以上,表達重組蛋白時,已成功放大到10000升;
    4)培養成本低,產物易分離。畢赤酵母所用發酵培養基十分廉價,一般碳源為甘油或葡萄糖及甲醇,其余為無機鹽,培養基中不含蛋白,有利于下游產品分離純化;而釀酒酵母所用誘導物一般為價格較高的半乳糖;
    5)外源蛋白基因遺傳穩定。一般外源蛋白基因整合到畢赤酵母染色體上,隨染色體復制而復制,不易丟失;
    6)作為真核表達系統,畢赤酵母具有真核生物的亞細胞結構,具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能。
    與其他表達系統比較 甲基酵母部分優點 與其他真核表達系統比較 與原核表達系統比較 1.屬于真核表達系統,具有一定的蛋白質翻譯后加工,有利于真核蛋白的表達優點 - + 2.AOX強效啟動子,外源基因產物表達量高,可以達到每升數克表達產物的水平 +++ + 3.酵母培養、轉化、高密度發酵等操作接近原核生物,遠較真核系統簡單,非常適合大規模工業化生產。 +++ = 4.可以誘導表達,也可以分泌表達,便于產物純化。 = + 5.可以甲醇代替IPTG作為誘導物,部分甲醇酵母更可以甲醇等工業產物替代葡萄糖作為碳源,生產成本低 +++ + + 表示優勝于;- 表示不如;= 表示差不多
    產品性能:
    優點——使用簡單,表達量高,His-tag便于純化
    缺點——酵母表達蛋白有時會出現蛋白切割問題

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