1．病原體檢查在一期梅毒的硬下疳部位取少許血清滲出液，放于玻片上，置暗視野顯微鏡下觀察，依據螺旋體強折光性和運動方式進行判斷，可以確診。
2．梅毒血清學檢查非梅毒螺旋體抗原血清試驗是梅毒常規篩查方法，包括有性病研究實驗室玻片試驗（VDRL）、血清不加熱反應素玻片試驗(USR)、快速血漿反應素環狀卡片試驗(RPR)。若VDRL、USR及RPR陽性，應做定量試驗，最好能做梅毒螺旋體抗原血清試驗，測定血清特異性抗體，常用方法有熒光密螺旋體抗體吸收試驗(FTA-ABS)和梅毒螺旋體血凝試驗(TPHA)。近年已開展用PCR技術取羊水檢測螺旋體診斷先天霉毒。