照高效液相色譜法（2010年版藥典二部附錄Ⅴ D）測定。
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇－水（80：20）為流動相；檢測波長為254nm。取己烯雌酚對照品約10mg，加三氯甲烷50ml使溶解，在暗處放置不少于5小時，量取5.0ml，揮干三氯甲烷，殘渣（己烯雌酚的順式體和反式體）加乙醇－水（1：1）25ml使溶解，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，出峰順序依次為己烯雌酚反式體峰與己烯雌酚順式體峰。理論板數按己烯雌酚反式體峰計算應不低于1000，己烯雌酚反式體峰與順式體峰的分離度應大于5.0。
取本品，精密稱定，加乙醇－水（1：1）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取己烯雌酚對照品，同法測定，按外標法以己烯雌酚順式體峰面積的1.26倍與己烯雌酚反式體峰面積的和計算，即得。
