（1）抗原片制備：Nichols株梅毒螺旋體（每高倍視野20條）抗原懸液，在玻片上涂數個直徑為5mm的菌膜，干后以甲醇固定。
（2）待檢血清預處理：待檢血清先經56%30分鐘滅活，取50ul血清與200ul吸附劑（Reiter株非致病密螺旋體）混勻，37℃作用30分鐘，以充分吸除非特異性抗體。
（2）夾心法熒光顯色：吸附后的待檢血清用磷酸鹽緩沖液（PBS）作1;20—1:320的倍比稀釋，將稀釋后的血清分別滴加于抗原菌膜上，置濕盒內37℃孵育30分鐘，然后用PBS洗片，并將玻片在PBS中浸洗，換液3次，每次5分鐘，吹干。各抗原反應片上滴加工作濃度熒光素標記的羊抗人lgG抗體，置濕盒37℃孵育30分鐘，再用PBS按前法洗片，干后用甘油緩沖液封片。
（3）熒光顯微鏡觀察：每次實驗設陽性、陰性、非特異性血清對照。陰性標準血清無熒光菌體或偶爾見熒光菌體出現：陽性對照可見多數（高倍視野15條）熒光菌體出現。并以此為參照作出待檢標本的判定。