一、實驗室檢查：
1.血清葉酸含量 為反映近期膳食葉酸攝入情況的指標。血清葉酸正常值為11.3～36.3nmol/L(5～16ng/ml)，血清葉酸＜6.8nmol/L(3ng/ml)表示缺乏。
2.紅細胞葉酸含量 為反映體內組織葉酸的儲備情況的指標。當紅細胞葉酸＜318nmol/L(140ng/ml)時表明缺乏。
3.血漿同型半胱氨酸含量 當受試者維生素B6及維生素B12營養狀況適宜時，血漿同型半胱氨酸可作為反映葉酸狀況的敏感指標。葉酸缺乏者血中葉酸水平降低，而血漿同型半胱氨酸含量增高，一般以同型半胱氨酸含量＞16μmol/L表示高于正常。其正常值為5～15μmol/L，當血漿同型半胱氨酸濃度升高，反應細胞內葉酸水平缺乏或依賴葉酸反應的功能受到損傷，但缺乏特異性，可以通過服用葉酸后血漿同型半胱氨酸濃度迅速下降以驗證。
二、其他輔助檢查：
1.骨髓檢查 大細胞性貧血，骨髓中出現特征性巨幼紅細胞。
2.放射學檢查 可發現脊柱裂。
3.B超檢查 可發現腦脊膜膨出，無腦畸形等。