ACA(抗心磷脂抗體)主要通過抑制血管內皮細胞合成PGI2,干擾血栓調節素、纖溶酶原激活劑和蛋白質C系統的活性,抑制抗凝血酶III的活化等而致凝血前高凝狀態,與復發性動靜脈血栓形成、反復自然流產及血小板減少癥關系密切。
其主要程序為用純心磷脂的無水乙醇溶液包被聚苯乙烯板,封閉后分別于標本孔和對照孔中加入一定稀釋度的被檢血清及陽性與陰性對照血清,之后加入酶標二抗和酶底物,終止反應后肉眼觀察結果或測吸光度(A)值。
具體步驟如下:
預步驟:先用一定濃度的心磷脂溶液包被聚苯乙烯板的小孔,4℃冰箱過夜,次日取出甩盡液體備用。
(1) 用微量移液器分別加待檢血清、陽性對照、陰性對照各100μl于1、2、3孔中,370C水浴箱溫育30min。
(2) 用PBS液洗板3次,每次3min,甩干。
(3) 每孔加入酶結合物2滴,370C水浴箱溫育30min。
(4) 用PBS液洗板3次,每次3min,甩干
(5) 每孔分別加入顯色A液、B液各1滴,混勻。370C水浴箱溫育5-10min。
(6) 取出肉眼觀察結果。如待檢血清溶液與陽性對照一致均為藍色,表明待檢血清為ACA+血清。