1、抗原、抗體濃度的選擇
以分別固定抗原含量與抗體濃度的方法，選取最小抗原量與最低抗體濃度，在免疫電泳后能出現最清晰項端狹窄且尖的錐形沉淀峰，長達2～5cm者為標準。一般抗原用量為0.5～5微克，抗血清用量為5～10微升，稀釋度于1：10～1：200之間進行選擇。
2、預復瓊脂玻板的制備
將溶化的1%預復瓊脂用滴管加玻板上，使之能將表面覆蓋即可，放于溫箱內干燥（或自然干燥），即可用以制備凝膠板。
3、抗血清瓊脂板制備
根據上述選擇結果，取一定量抗血清與一定量融化并冷卻至56℃的1.5%巴比妥緩沖瓊脂混合，使抗血清的濃度為以上述方法選擇出的最適濃度，澆制抗血清瓊脂板。瓊脂厚度為1～2mm，玻板大小可根據實驗所需而確定。如用5×7.5cm大小玻板時，約需抗血清瓊脂6ml.
4、打孔、加樣
待瓊脂凝固后，于距玻板一長邊10mm處，以3mm孔徑打孔器打孔一排，孔距5mm.于各孔中加入抗原液，每孔10微升。每次實驗中應加入幾個不同濃度的標準抗原以作對照。稀釋范圍包括標本含量的最高與最低水平。
5、電泳
將瓊脂板置于電泳槽橫梁上，加樣端位于負極，以雙層濾紙聯接瓊脂板與電泳槽內緩沖液（槽內緩沖液為0.06M pH8.6巴比妥緩沖液）。接通電源，板端電壓3v/cm，電流強度3mA/cm，電泳5小時。
6、結果判定（電泳結果示意圖點擊展開）
電泳畢，取出瓊脂板，依次用生理鹽水、蒸餾水浸泡后，加1%鞣酸沖洗瓊脂板，晾干，即可觀察與測定結果。也可以常規蛋白質染色法染色后觀測結果。測定結果的方法有兩種：一是測量沉淀峰的高度（自孔中央至峰尖），以mm計；另一是以求積儀測量沉淀峰的面積，以mm2計。前者較簡便，后者較準確。根據測定的結果，從標準曲線中計算出待檢標本中的抗原含量。
7、標準曲線制定
用上述選擇好的最適濃度抗血清制備瓊脂板。打孔，加入合適比例的5～10個標準抗原濃度，反復試驗10次，取每次電泳后所測定的沉淀峰高度（或面積）的平均值，繪出標準曲線。