高通量測序技術及原理介紹

高通量測序技術及原理介紹如下：

1.什么是高通量測序

高通量測序技術也被稱作二代測序技術（Next Generation Sequencing, NGS），這是相對一代測序技術（Sanger Sequencing）而言的，同時由于高通量測序的出現使得我們能對一個物種的基因組和轉錄組進行全面、細致的分析成為可能，所以又被稱為深度測序(deep sequencing)。

高通量測序技術以能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定和一般讀長較短等為標志，通過讀取多個短DNA 片段，拼接成完整的序列信息。與一代測序Sanger法相比，高通量測序技術在處理大規模樣品時具有顯著的優勢，在測序速度及測序通量上具有無可取代的地位，是目前組學研究中的核心技術。 

2.原理

將基因組 DNA 片斷化，然后克隆到質粒載體上，再轉化大腸桿菌。對于每個測序反應，挑出單克隆，并純化質粒 DNA。每個每個循環測序反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)使之擴增，并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)使之終止。由于ddNTP的2’和3’都不含羥基，其在DNA的合成過程中不能形成磷酸二酯鍵。

因此可以用來中斷DNA合成反應，在4個DNA合成反應體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標記的ddNTP（分為：ddATP,ddCTP,ddGTP和ddTTP），使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止，并產生熒光標記。

最終得到一組長幾百至幾千堿基的鏈終止產物，它們具有共同的起始點，但終止在不同的的核苷酸上。通過凝膠電泳和放射自顯影后可以根據電泳帶的位置確定待測分子的DNA序列。