照高效液相色譜法(通則0512)測定。供試品溶液取本品適量,精密稱定,加pH6.5磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋制成每1ml中約含青霉素Ⅴ1mg的溶液。對照品溶液取青霉素V對照品適量,精密稱定,加pH6.5磷酸鹽緩沖液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含青霉素V1mg的溶液色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以有關物質項下流動相A-流動相B(60:40)為流動相;檢測波長為268nm,進樣體積20lpH6.5磷酸鹽緩沖液、系統適用性溶液與系統適用性要求見有關物質項下測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算供試品中C16H18N2O3S的含量。每1mg的C16H18N2O3S相當于1695青霉素V單位。