鑒別
(1)本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜(光譜集975圖)一致。如不一致,取本品與拉米夫定對照品分別用甲醇溶解,揮發后測定,本品的紅外光吸收圖譜應與拉米夫定對照品的圖譜一致(通則0402)(2)在拉米夫定對映體檢查項下記錄的色譜圖中,供試品溶液主峰的保留時間應與系統適用性溶液中拉米夫定峰的保留時間一致。
檢查
溶液的顏色取本品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1m中含50mg的溶液,照紫外-可見分光光度法(通則0401),用4cm石英吸收池,在440nm的波長處測定吸光度不得過0.3。有關物質照高效液相色譜法(通則0512)測定。供試品溶液取本品適量,精密稱定,加流動相溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.5mg的溶液對照溶液精密量取供試品溶液1ml,置100m1量瓶中,用流動相稀釋至刻度,再精密量取5ml,置50ml量瓶中,用流動相稀釋至刻度。對照品溶液取水楊酸對照品適量,精密稱定,加流動相溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.5μg的溶液。系統適用性溶液取胞嘧啶對照品與尿嘧啶對照品各適量,加流動相溶解并稀釋制成每1ml中分別含10g的溶液,作為溶液(1)。另取拉米夫定分離度混合物B對照品(包含拉米夫定與雜質Ⅱ)5mg,置10ml量瓶中,加流動相2ml,振搖使溶解,再精密加入溶液(1)1ml,用流動相稀釋至刻度搖勻色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑( ZorbaxXDBC18,4.6mm×250mm,5m或效能相當的色譜柱);以0.025mol/L醋酸銨溶液(取醋酸銨1.9g,加水900ml使溶解,用冰醋酸調節pH值至3.8,用水稀釋至1000ml)-甲醇(95:5)為流動相;檢測波長為277nm;柱溫為35℃;進樣體積10l系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中,胞嘧啶、尿嘧啶、雜質Ⅱ和拉米夫定各峰間的分離度均應符合要求測定法精密量取供試品溶液、對照溶液與對照品溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至供試品溶液主峰保留時間的3倍。限度供試品溶液色譜圖中如有雜質峰,水楊酸按外標法以峰面積計算不得過0.1%,其他各雜質峰面積乘以各自的校正因子后與對照溶液主峰面積進行比較,雜質I的校正峰面積不得大于對照溶液主峰面積的3倍(0.3%),雜質Ⅱ的校正峰面積不得大于對照溶液主峰面積的2倍(0.2%),其他單個雜質的校正峰面積均不得大于對照溶液主峰的面積(0.1%),雜質總量不得過0.6%(各雜質峰的相對保留時間和校正因子見下表)。雜質相對保留時間校正因子胞嘧尿嘧啶0.3雜質I0.36雜質Ⅱ拉米夫定雜質Ⅲ其他未知雜質1.0拉米夫定對映體照高效液相色譜法(通則0512)測定供試品溶液取本品適量,加水溶解并稀釋制成每1中約含0.25mg的溶液對照溶液精密量取供試品溶液1m1,置100m1量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,再精密量取3ml,置10m1量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻系統適用性溶液取拉米夫定分離度混合物A對照品含拉米夫定與拉米夫定對映體)約2.5mg,置10m1量瓶中加水溶解并稀釋至刻度,搖勻色譜條件用環糊精鍵合硅膠為填充劑;以0.1mol/L醋酸銨溶液-甲醇(95:5)為流動相,檢測波長為270nm;柱溫為15~30℃;流速為每分鐘1.0ml;進樣體積10gl系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中,拉米夫定峰與拉米夫定對映體峰間的分離度應不小于1.5測定法精密量取供試品溶液與對照溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。限度供試品溶液色譜圖中拉米夫定對映體峰面積不得大于對照溶液主峰面積(0.3%)。殘留溶劑甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、乙酸異丙酯氯甲烷、三乙胺、四氬呋喃與N,N二甲基甲酰胺照殘留 溶劑測定法(通則0861第三法)測定。內標貯備液取2-戊酮0.2ml,置100ml量瓶中,用二甲基亞砜-水(1:1)稀釋至刻度,搖勻。內標溶液精密量取內標貯備液20ml,置200ml量瓶中,用二甲基亞砜-水(1:1)稀釋至刻度,搖勻。供試品溶液取本品約0.5g,精密稱定,精密加入內標溶液10ml,振搖使溶解對照品貯備液精密稱取甲醇300mg、無水乙醇500異丙醇500mg、乙酸乙酯500mg、乙酸異丙酯500mg、二氯甲烷60mg、三乙胺100mg、四氫呋喃72mg與N,N-二甲基甲酰胺88mg,置同一200ml量瓶中,用二甲基亞砜水(1:1)稀釋至刻度,搖勻。對照品溶液精密量取對照品貯備液5ml,置50ml量瓶中,精密加入內標貯備液5ml,用二甲基亞砜-水(1:1)稀釋至刻度,搖勻。色譜條件采用6%氰丙基苯基-94%甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管色譜柱(HP624,0.53mm×105m,3m或極性相近);進樣口溫度為150℃;分流比為10:1;初始柱溫為40℃,保持5分鐘,然后以每分鐘5℃的升溫速率升至100℃,再以每分鐘10℃的升溫速率升至200℃,維持5分鐘;載氣流速為每分鐘5ml;檢測器溫度為250℃;進樣體積1pl測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液,分別注入氣相色譜儀,記錄色譜圖。限度按內標法以峰面積比值計算,三乙胺不得過0.032%,其他均應符合規定。乙醚、正己烷與甲苯照殘留溶劑測定法(通則0861第法)測定供試品溶液取本品約0.5g,精密稱定,置頂空瓶中,精密加入N,N-二甲基乙酰胺5ml,搖勻。對照品貯備液精密稱取乙醚500mg、正已烷29mg和甲苯89mg,置同一100ml量瓶中,用N,N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度,搖勻。對照品溶液精密量取對照品貯備液5ml,置50ml量瓶中,用N,N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度,搖勻,精密量取5ml,置頂空瓶中。色譜條件采用6%氰丙基苯基-94%甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管色譜柱(HP-624,0.53mm×75m,3gm或極性相近);進樣口溫度為200℃;分流比為3:1;初始柱溫為40℃,保持5分鐘,然后以每分鐘10℃的升溫速率升至200℃,保持5分鐘;載氣流速為每分鐘5ml;檢測器溫度為250℃;頂空瓶平衡溫度為90℃;平衡時間為30分鐘測定法取供試品溶液和對照品溶液分別頂空進樣,記錄色譜圖。限度按外標法以峰面積計算,均應符合規定水分取本品,照水分測定法(通則0832第一法1)測定, 含水分不得過0.2%熾灼殘渣取本品1.0g,依法檢查(通則遺留殘渣不得過0.1%。重金屬取熾灼殘渣項下遺留的殘渣,依法檢查(通則0821第二法),含重金屬不得過百萬分之二十