1．飲酒可致本品肝毒性發生率增加，增加本品代謝，需調整劑量，并密切觀察患者有無肝毒性出現。
2．對氨基水楊酸鹽可影響本品的吸收，導致利福平血藥濃度減低；如必須聯合應用時，兩者服用間隔至少6小時。
3．本品與乙硫異煙胺、吡嗪酰胺或其他抗結核藥合用可加重其不良反應。與其他肝毒性藥合用可增加本品的肝毒性，宜盡量避免。
4．氯苯酚嗪可減少利福平的吸收，達峰時間延遲且半衰期延長。
5．與咪康唑或酮康唑合用可使后兩者血藥濃度減低，故本品不宜與咪唑類合用。
6．腎上腺皮質激素(糖皮質激素、鹽皮質激素)、抗凝藥、氨茶堿、茶堿、氯霉素、氯貝丁酯、環孢素、維拉帕米(異搏定)、妥卡尼、普羅帕酮、甲氧芐啶、香豆素或茚滿二酮衍生物、口服降血糖藥、促皮質素、氨苯砜、洋地黃苷類、丙吡胺、奎尼丁等與本品合用時，由于利福平能誘導肝微粒體酶活性，可使上述藥物的藥效減弱，因此除地高辛和氨苯砜外，在用本品前和療程中上述藥物需調整劑量。本品與香豆素或茚滿二酮類合用時應每日或定期測定凝血酶原時間，據以調整劑量。
7．本品可促進雌激素的代謝或減少其腸肝循環，降低口服避孕藥的作用，導致月經不規則，月經間期出血和計劃外妊娠。所以，患者服用本品時，應改用其他避孕方法。
8．本品可誘導肝微粒體酶，增加抗腫瘤藥達卡巴嗪(dacarbazine)、環磷酰胺的代謝，形成烷化代謝物，促使白細胞減低，因此需調整劑量。
9．與地西泮(安定)合用可增加后者的消除，使其血藥濃度減低，故需調整劑量。
10．本品可增加苯妥英在肝臟中的代謝，故兩者合用時應測定苯妥英血藥濃度并調整用量。
11．本品可增加左旋甲狀腺素在肝臟中的降解、因此兩者合用時左旋甲狀腺素劑量應增加。
12．本品亦可增加美沙酮、美西律在肝臟中的代謝，引起美沙酮撤藥癥狀和美西律血藥濃度減低，故合用時后兩者需調整劑量。
13．丙磺舒可與利福平競爭被肝細胞的攝人，使利福平血藥濃度增高并產生毒性反應。但該作用不穩定，故通常不宜加用丙磺舒以增高本品的血藥濃度。
14．異煙肼為維生素B6的拮抗劑，可增加維生素B6經腎排出量，易致周圍神經炎的發生。同時服用維生素B6者，需酌情增加用量。
15．本品不宜與其他神經毒藥物合用，以免增加神經毒性。
16．與環絲氨酸合用時可增加中樞神經系統的不良反應(如頭昏或嗜睡)，需調整劑量，并密切觀察中樞神經系統毒性征象，尤其對于從事需要靈敏度較高工作的患者。
17．本品可抑制卡馬西平的代謝，使其血藥濃度增高，引起毒性反應；卡馬西平則可誘導異煙肼的微粒體代謝，使具有肝毒性的中間代謝物增加。
18．與對乙酰氨基酚合用時，由于異煙肼可誘導肝細胞色素P-450，使前者形成毒性代謝物的量增加，可增加肝毒性及腎毒性。
19．與阿芬太尼合用時，由于異煙肼為肝藥酶抑制劑，可延長阿芬太尼的作用；與雙硫侖合用可增強其中樞神經系統作用，產生眩暈、動作不協調、易激惹、失眠等；與安氟醚合用可增加具有腎毒性的無機氟代謝物的形成。
20．不可與麻黃堿、顛茄同時服用，以免發生或增加不良反應。
21．含鋁制酸藥可延緩并減少異煙肼口服后的吸收，使血藥濃度減低，應避免同時使用，或在口服制酸藥前至少1小時服用本品。