北京檢驗檢疫局科研項目實現一步快速定型
H7N9禽流感病毒檢測取得重大突破
4月17日，在北京檢驗檢疫局承擔的國家質檢總局科技計劃項目“禽流感病毒H7N9亞型雙重熒光RT-PCR定型技術研究”鑒定會上，專家組一致認為：該項目創新性地實現了對禽流感病毒H7N9亞型的一步快速定型，可在一次檢測中確認樣品中是否存在H7N9亞型禽流感病毒或其他H7亞型和N9亞型的禽流感病毒;在通用性、特異性、靈敏性上，技術優勢突出。專家組同意項目成果通過鑒定，并建議在進一步擴大和完善動物臨床驗證實驗基礎上，盡快推廣應用。
目前，在國內通用的確診禽類中禽流感病毒H7N9亞型的檢測技術中，除采用傳統的雞胚病毒分離方法外，通常采用核酸檢測方法，如普通PCR方法和基于熒光 RT-PCR的“二步法”，但還沒有建立起采用熒光RT-PCR技術“一步法”檢測禽流感病毒H7N9亞型的方法。
據該項目組負責人、北京局檢驗檢疫技術中心動物實驗室博士高志強介紹，項目在實驗過程中，共建立了3種檢測方法。最終的禽流感病毒H7N9亞型雙重熒光 RT-PCR檢測方法是在禽流感病毒H7亞型和N9亞型單重熒光RT-PCR檢測方法的基礎上通過優化建立，從而實現了對禽流感病毒H7N9亞型的一步快速定型。這種方法不僅能檢測最近流行的H7N9毒株，還可以用于篩查其他H7亞型毒株。此方法不僅引物特異，而且探針特異，這一“雙特異”性保證了結果的準確性，同時比普通PCR檢測技術要靈敏100~1000倍。
高志強還指出，本項目在實施過程中，制備了H7N9病毒的HA和NA基因全長的外標物質，具有均勻和穩定的特點，可在檢測過程中對逆轉錄和PCR擴增這兩個重要環節進行控制，對規范診斷檢測試劑和實驗室質量控制具有重要意義，使不同試劑的檢測結果具有了可比性，可用于消除不同人員操作間的差異，解決了目前 H7N9檢測缺乏質量控制外標物質的現狀。
鑒定會上，由來自中國農業大學、中國醫學科學院、中國科學院、中國農業科學院等單位的7名專家組成的鑒定委員會審查了項目組提交的相關資料，聽取了項目組的匯報，審閱了相關鑒定資料，最終同意項目成果通過鑒定。
北京局自2001年開始開展熒光RT-PCR檢測技術研究，是國內首家將熒光PCR技術應用到檢驗檢疫領域和動物疫病防控領域的單位，并在實踐中不斷發展完善熒光RT-PCR檢測技術，先后建立了禽流感病毒、新城疫病毒、口蹄疫病毒等多項熒光RT-PCR檢測技術，獲得國內首個動物疫病熒光PCR檢測新藥證書。
據悉，自3月31日國家衛生和計劃生育委員會通報上海和安徽發現3例人感染H7N9禽流感病例后，在國家質檢總局有關領導的指導下，該局第一時間成立了禽流感檢測技術研究應急專項小組。北京局局長齊京安號召：“疫情就是命令，我們要迅速行動、全力以赴，為保障人民群眾身體健康作出檢驗檢疫部門的貢獻。”一聲令下，科技人員紛紛行動起來：及時收集、查閱最新流感資料;第一時間獲得此次H7N9亞型禽流感病毒的安徽株和上海株的基因序列;結合實驗室多年整理保存的禽流感研究資料，重點針對HA基因和NA基因進行序列分析比對……經過一系列努力，最終找到了變異位點，確定了雙重熒光RT-PCR檢測技術研究方案。
北京局副局長李忠榜表示，該項目為禽流感病毒H7N9亞型的檢測提供了快速、高效方法，能夠檢測到樣品中微量禽流感病毒。該課題鑒定后，課題組還將做大量的驗證工作，在實踐的檢驗過程中不斷完善并制定禽流感病毒H7N9亞型檢測國家標準，以便將該技術盡早應用到防控工作中，為確保活禽和禽產品的進出口安全，為國內養殖企業禽流感疫情普查，為老百姓吃上放心禽產品提供服務。同時，該局會盡快將研究成果應用到檢驗檢疫工作中，接受實踐檢驗，為提高口岸一線的檢測能力做好技術儲備和技術支持工作。
