質譜沙龍第七期活動報道

2008年4月27日下午，質譜沙龍第七期活動在北京第二炮兵總醫院制劑樓舉行。這個系列活動已經舉辦了六期，由二炮總醫院、北京師范大學質譜中心和AB公司共同發起和組織，由AB公司贊助，以專題報告和討論為主，參與者均為從事液質聯用工作的一線實驗人員，互相交流儀器使用和應用方法的經驗和心得。此次到會者除了來自二炮總醫院、北京師范大學、軍事醫學科學院、西苑醫院、朝陽醫院、北大醫學院、北醫三院、空軍總醫院、北京益科生公司、SGS北京公司、AB公司等老朋友外，還有來自中科院藥植所的新朋友加盟。分析測試百科網參加了該次活動。三個報告人作了非常有意思的幾個報告。

讓LC-MS/MS在臨床上發揮更大作用

二炮總醫院藥劑科主任劉麗宏博士作題為《LC-MS/MS技術在醫院藥學中的應用》的報告，結合自己的工作實例，談了二炮總醫院藥劑科使用LC-MS/MS的主要工作，和在臨床診斷上發揮的作用。最吸引人的是其中一個臨床肝移植的例子，有力地說明了：通過外科醫生和藥劑科的通力合作，在肝移植方面成功實現個體化給藥的突破性探索和臨床成果。

前不久，中央電視臺十套《科技之光》報道了二炮總醫院個體化給藥指導下的肝臟活體移植。該例手術是外科醫生和藥劑科通力合作的成功代表作。從早期診斷時，藥劑科就先通過基因測序確定患者屬于慢代謝型，由此根據個體差異，制定了良好的給藥方案。在術后消除排異反應的用藥中，藥劑科又利用液質聯用技術，成功地、實時監測血藥濃度，為合理用藥提供了決策依據。至術后15日進實驗室檢查，各項功能基本恢復，患者平穩出院。而采用傳統方案，患者一半需幾個月，甚至一年才能恢復。劉主任還介紹了一患者在北京某醫院做的肝臟移植手術，盡管手術很成功，但術后排異現象嚴重，后慕名轉院到二炮醫院。二炮醫院根據其個體性質制定了用藥方案，最后患者排異現象很快消除。迄今為止，已有十幾例個體化給藥病例，均獲成功。

轟動的成果來源于科研人員的辛勤努力和探索，也來源于藥劑科和臨床外科醫生的通力合作。

研究背景
 
器官移植已成為挽救終末期臟器功能衰竭患者生命的最有效治療手段，而術后的抗排斥反應以及存活率是器官移植的最大障礙。在過去20多年里，醫藥專家一直都在研究和探索臨床“個體化給藥方式”。
 
由于供體器官和受體器官之間會產生免疫反應，因此器官移植后需要免疫抑制劑來抑制這種免疫反應。FK506(他克莫斯)是一種強效的免疫抑制劑，在臨床上主要應用于預防和治療器官移植后的排異反應。由于不同個體對FK506(他克莫斯)藥物的代謝時間長短有差異，普遍存在這樣一個問題，有些人是快代謝型，如果劑量不足會導致排斥反應；而有些人是慢代謝型，如果劑量超過而無法及時代謝又會造成許多毒副作用，同樣會給并人帶來痛苦。好多患者進行肝移植之后，有的要幾個月，有的甚至要一年才能正常出院。
 
重大突破
 
二炮總醫院藥劑主任劉麗宏博士帶領科研團隊潛心研究，大膽嘗試，歷經近一年的時間，在兩方面獲得了重大突破：

一、通過基因檢測確定患者的FK506藥物代謝類型是快代謝型還是慢代謝型，根據不同代謝類型制定個體化的初步給藥方案(主要指用藥首劑量和采血時間)；

二、建立LC-MS/MS方法檢測血藥濃度，對患者定時進行血藥濃度監測并相應調整給藥劑量。有效減少了不良反應或急慢性排斥反應的發生，在真正意義上達到了個體化給藥的目的。

《科技之光》報道的這個病例是二炮總醫院研究成果的首次臨床應用。劉主任也談到，在當時制定術后給藥方案時，她和她的團隊也面臨較大的壓力。FK506是一種進口藥，一般醫院都是按說明書確定患者的用藥量。就這種藥來說，西方國家的人種一般都是快代謝型，而東方人種多為慢代謝型，如果僅按照說明書給藥，常會產生藥物的毒副作用，使術后病人忍受長達幾個月的痛苦。按照當時藥劑科根據基因型確定的給藥方案來看，提示的給藥方案比說明書要少1倍以上。如果萬一出現失誤，將造成排異反應嚴重等重大后果。但團隊本著治病救人的初衷，最終相信科學檢測的結果，同時也獲得了臨床外科醫生的大力配合和支持，在給藥期間實時監測血藥濃度，獲得了巨大的成功。

這一先進技術在真正意義上達到了個體化給藥的目的，在國內是首創，在國際上也有很大的影響。這一技術突破了器官移植的最大障礙，對器官移植技術在未來的推廣和發展有著非常大的推動作用。

在沙龍活動后，其它醫院的代表有感而發，目前國內的很多醫院，藥劑科在臨床治療的技術和決策支持上，都比較無力，因此造成的負面循環就是醫院越來越不重視藥劑科。而二炮總醫院的藥劑科為大家樹立了一個典范，希望更多的藥劑科的科研分析人員，能夠向他們學習，用自己的努力和經驗，為臨床治療提供先進的技術和決策支持。

中央電視臺十套《科技之光》報道

《LC-MS/MS技術在醫院藥學中的應用》

液質聯用定性研究中藥有效成分的測定方法

來自西苑醫院的林力博士做了《液質聯用定性研究中藥有效成分的測定方法》。中藥有效成分的特點是成分多、同分異構體多、化學性質差異大等。林力博士研究組前期通過文獻檢索收集化合物的物理化學信息和色譜信息，給后續的工作帶來了很大的方便。

液質聯用定性的步驟是：1.從總離子流圖，提取離子流圖;2.查看該離子圖下的一級質譜圖，明確分子離子峰;3.以此為母離子，做其二級質譜圖，從得到的碎片來推斷化合物的結構。并以丹參為例，介紹了丹參有效成分的定性研究步驟，同時強調了液相分離對中藥成分定性研究的重要性。

林博士還與大家分享了在該項研究過程中的經驗：比如對于碰撞參數的調整；分子量300以上的干擾少；本底離子和雜質會對二級質譜產生的影響，并提出使用過程中一定要注意管道清洗。

最后，林博士呼吁大家可以共享一些中藥的二級譜圖庫，他本人已經建庫的幾十種中藥也很愿意同有興趣合作的液質聯用單位分享。

《液質聯用定性研究中藥有效成分的測定方法》

準確的定量和快速篩查方法：用LC/MS/MS做臨床氨基酸測定

來自AB公司的市場開拓專員 李丹博士，應大家的邀請，為大家做了《用LC/MS/MS做臨床氨基酸測定》的報告。

氨基酸是構建生物機體的眾多生物活性大分子之一，是構建細胞、修復組織的基礎材料。氨基酸的平衡和適量的供應是人體健康的基本前提，任何一種氨基酸供應缺乏，都會影響免疫系統和其他正常功能的發揮，使人處于亞健康狀態，變得比較容易遭受疾病的侵襲。

傳統的氨基酸檢測是用氨基酸分析儀。但采用此方法，存在檢測氨基酸種類少（18種）、選擇性差、定量不佳等問題。

針對這些問題，有人試著用質譜來檢測氨基酸。但氨基酸的分子量都很小（一般在120左右）。上面林力博士也講到，在用質譜做檢測時，如果分量小于300，那么得到的結果干擾比較大。為此，AB公司把自己在蛋白質組學上的應用成果——iTRAQ試劑應用于臨床氨基酸檢測上，并捆綁了一種45種氨基酸標樣的試劑盒，實現了氨基酸的準確定量和快速篩查。

iTRAQ試劑由分子量115和114的一對試劑組成，實驗中，一組（如115）與待測樣品孵育，一組（如114）與已知含量的45種氨基酸標樣的試劑盒孵育，然后將二者混合，一起進LC-MS/MS檢測。一個常規的液相流程大概為25分鐘（超快速液相大概為15分鐘）。

這種方法，結合了液相色譜的分離度，同時抗干擾能力、選擇性強，定量準確、快速。兩種孵育條件下的同樣的氨基酸，在色譜上保留時間一致、一級質譜也完全一樣（平衡子的作用）；根據設定好的MRM方法，同樣分子量的結合115的樣品氨基酸，和結合114的氨基酸標樣，在二級質譜中，氨基酸都作為中性丟失去除，僅留下特征性的115和114離子，利用他們的峰面積，可直接定量。這套試劑，大概成本在十幾個美元/每次實驗。這種應用在臨床上，可用于肝性腦病、腎病、新生兒遺傳病等篩查。

這里，在座的各位聽眾不得不佩服AB公司，他們真正是一個提供解決方案的公司，不僅制造質譜，還制造配套的試劑——提供給客戶一攬子解決方案，并幫助客戶賺錢。

二炮總醫院已訂購了該試劑盒，相信這個團隊很快會有更新的成果推出。也希望有興趣的LC-MS/MS人員與他們聯系。

氨基酸的測定

45種氨基酸的臨床意義