稱取8.0g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4溶于800mL蒸餾水中，用HCl調節溶液至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可得0.01M PBS緩沖液。
配制PBS溶液的最簡單方法是使用PBS片，后者是已制好的配方片劑，當需要使用PBS時只需將其溶解于一定量的蒸餾水里即可，標準容積有：100、200、500和1000 mL。
配好的PBS溶液經分裝并高壓滅菌（20分鐘，121℃）后即可用于細胞培養。
PBS可儲存于室溫，但如果溶液未經滅菌而希望保存時間長些，則需要將其冷藏于冰箱中，這樣會抑制細菌生長。然而濃縮儲存液在冷藏時會產生沉淀，在使用之前需要置于室溫使沉淀完全溶解。