一、實時熒光定量PCR原理
（一）定義：在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法 。
（二）實時原理
1、常規PCR技術：
對PCR擴增反應的終點產物進行定量和定性分析無法對起始模板準確定量，無法對擴增反應實時檢測。
2、實時定量PCR技術：
利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化，通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析
3、如何對起始模板定量？
通過Ct值和標準曲線對起始模板進行定量分析.
4、幾個概念：
（1）擴增曲線 ：
（2） 熒光閾值：
（3）Ct值：
CT值的重現性：
5、定量原理：
理想的PCR反應： X=X0*2n
非理想的PCR反應： X=X0 (1+Ex)n
n：擴增反應的循環次數
X：第n次循環后的產物量
X0：初始模板量
Ex：擴增效率
5、標準曲線
6、絕對定量
1）確定未知樣品的 C(t)值
2）通過標準曲線由未知樣品的C(t)值推算出其初始量