1. 4%多聚甲醛常規灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中過夜。蠟塊制作。切片，貼片。0.01 M KPBS清洗5 min×3后； 2. 加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液（甲醇80 ml+0.01 M KPBS 100 ml+30%過氧化氫）30 min，以消除內源性過氧化物酶的影響，0.01 M PBS清洗5 min×3； 3. 加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100+0.01 M KPBS 100 ml）30 min，以增加細胞的通透性，0.01 M KPBS清洗5 min×3； 4. 加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00 g+0.01 M PBS 100 ml+疊氮納0.08 g）稀釋的一抗，4℃存放24-48 h；吸去抗體，0.01 M KPBS洗5 min×3； 5. 加入0.01 M KPBS稀釋的的二抗，室溫孵育2 h。0.01 M KPBS洗5 min×3； 6. 加入ABC復合物之類的抗體，室溫孵育2 h，0.01 M KPBS洗5 min×3；蒸餾水迅速沖三次； 7. 加入顯色液，進行免疫組織化學顯色，時間一般不超過30 min，可不時在顯微鏡下進行觀察，待細胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液，用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01 M KPBS終止反應； 8. 梯度酒精脫水之后，封片，拍照。 展開 | 