同時測定嬰兒配方奶粉、成人營養品和蛋白粉中三聚氰胺和三聚氰酸的快速、靈敏的方法
2008年，三聚氰胺事件爆發，國家質檢總局、衛生部等有關部門展開對乳制品全面清查，發現有多種嬰幼兒奶粉、液態奶、酸奶含有三聚氰胺。隨后，糖果、巧克力、咖啡奶精等涉乳食品行業也受到波及，食品行業發生重大的食品安全連鎖反應。如何防止“三聚氰胺”卷土重來，我們共同關注著........
同時測定嬰兒配方奶粉、成人營養品和蛋白粉中三聚氰胺和三聚氰酸的快速、靈敏的方法
摘要
由于嬰兒配方奶粉生產商需要檢測每批原料和成品是否存在三聚氰胺和三聚氰酸，因此有必要提供一種快速分析方法。本文所述的基于ACQUITY
UPLC/MS/MS的方法由一家大型嬰兒配方奶粉生產商的實驗室開發；經證實，該方法非常靈敏且極其耐用，每天能分析100多個樣本。
引言
近期牛奶和乳制品中含三聚氰胺事件已經導致中國數以千計的兒童患病，有部分患兒死亡。三聚氰胺（1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺；CAS#
108-78-1）常用于塑料、粘合劑、涂料和阻燃劑的生產。三聚氰酸（1,3,5-三嗪-2,4,6-三酮；CAS#
108-80-5）是三聚氰胺的一種結構類似物，多作為三聚氰胺的雜質而被發現。這些化合物的化學結構如圖1所示。
三聚氰胺因其高含氮量而在中國某些地區被用以提高牛奶的表觀蛋白含量。人們認為，這兩種化合物相結合可引起腎毒性。迄今為止，很多監管機構已經提議將其在嬰兒配方奶粉和成人食品中的限量分別定為1.0
ppm（μg/g）和2.5 ppm（μg/g）。美國FDA最近提議1.0
ppm可作為嬰兒配方奶粉成品中三聚氰胺或三聚氰酸的容許量，但規定這兩種化合物不能同時存在。其他監管機構（如臺灣）將三聚氰胺的限量降低至0.05
ppm。用于檢測面粉1和寵物食品2中的三聚氰胺和三聚氰酸的方法已經進行過介紹，Shia和Diehl描述了使用特殊的SPE對嬰兒配方奶粉3中三聚氰胺和三聚氰酸進行萃取。然而，為確保嬰兒配方奶粉的安全性并盡可能及時滿足監管機構的檢測要求，我們開發了一種用于同步測定三聚氰胺（MEL）和三聚氰酸（CYA）的高靈敏、更快速的新型檢測方法，以實現高通量的產品篩查。該方法也適用于分析原料（如酪蛋白或乳清蛋白分離物），從而在用于嬰兒配方奶粉生產前先對其進行核實。同位素內標用于校正樣品制備過程中出現的微小偏差，并校正儀器對目標化合物響應中存在的基質效應。
試驗
三聚氰胺和三聚氰酸的儲備液分別溶解于100mL水中而配制出濃度為100μg/mL的溶液。混合標準溶液通過用流動相B將三聚氰胺和三聚氰酸儲備液分別稀釋為 2.5μg/mL和5.0μg/mL而制得。混合標準溶液每天現用現配。
三聚氰胺（13C3-15N3-三聚氰胺）和三聚氰酸（13C3-15N3-三聚氰酸）的同位素內標以0.1mg/mL水溶液的形式從劍橋同位素實驗室購得。分析當天，穩定的同位素混合標準溶液通過將同位素內標溶液、標準溶液及2%的甲酸乙腈溶液按1:1:2的比例進行混合而制得
制備程序
■ 對于原料，稱量1.0g樣品放入一個20mL的玻璃瓶中
■ 添加10.0g水并混勻，使樣品溶解-將溶解后的樣品用作營養品樣品
■ 稱取1.0g產品（粉末或液體）或制備好的原料放入一個20mL的玻璃瓶中。
■ 加入等量的混合內標溶液
■ 加入5mL的甲酸水溶液（體積比2%）
■ 通過渦旋混合15秒左右或混合至所有固體均已溶解為止
■ 在第二個20mL的玻璃瓶中放入9mL含10mM醋酸銨的體積比為97/3的乙腈/水溶液
■ 將1 mL制備好的樣品溶液轉移至上述第二個玻璃瓶。
■ 混勻
■ 通過一個0.2μm的PTFE濾膜過濾樣品并將濾液收集到進樣瓶中
UPLC條件
液相色譜系統： 沃特世ACQUITY UPLC?
色譜柱： ACQUITY UPLC BEH HILIC
2.1 x 150，1.7μm
流動相： A：10 mM醋酸銨水溶液
B：溶于97/3乙腈／水的10 mM醋酸銨
弱洗針液： 甲醇
強洗針液： 水
進樣針類型： PEEK
定量環： 10μL
進樣類型： 滿環進樣
