2．葡萄糖代謝類型鑒別試驗
(1)原理：細菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型；能進行無氧降解的為發酵型；不分解葡萄糖的細菌為產堿型。發酵型細菌無論在有氧或無氧環境中都能分解葡萄糖，而氧化型細菌在無氧環境中則不能分解葡萄糖。本試驗又稱氧化發酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）試驗，可用于區別細菌的代謝類型。
(2)方法：挑取少許純培養物（不要從選擇性平板中挑取）接種2支HL培養管中，在其中一管加入高度至少為0.5cm的無菌液體石蠟以隔絕空氣（作為密封管），另一管不加（作為開放管）。置35℃孵箱孵育48h以上。
(3)結果： 兩管培養基均不產酸（顏色不變）為陰性；兩管都產酸（變黃）為發酵型；加液體石蠟管不產酸，不加液體石蠟管產酸為氧化型。
(4)應用：主要用于腸桿菌科與其它非發酵菌的鑒別。腸桿菌科、弧菌科細菌為發酵型，非發酵菌為氧化型或產堿型。也可用于鑒別葡萄球菌（發酵型）與微球菌（氧化型）。
3．甲基紅（MR）試驗
(1)原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸進一步被分解為甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培養基pH下降至4.5以下時，加入甲基紅指示劑呈紅色。如細菌分解葡萄糖產酸量少，或產生的酸進一步轉化為其它物質（如醇、醛、酮、氣體和水），培養基pH在
5.4以上，加入甲基紅指示劑呈桔黃色。
(2)方法：將待試菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培養基中滴加5~6滴甲基紅指示劑，立即觀察結果。
(3)結果判定：呈現紅色者為陽性，桔黃色為陰性，桔紅色為弱陽性。
(4)應用：常用于腸桿菌科內某些種屬的鑒別，如大腸埃希菌和產氣腸桿菌，前者為陽性，后者為陰性。腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬為陰性，而沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬等為陽性。
4．β－半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）
(1)原理：乳糖發酵過程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些細菌只有半乳糖苷酶，因而只能遲緩發酵乳糖，所有乳糖快速發酵和遲緩發酵的細菌均可快速水解鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黃色的鄰硝基酚。用于枸櫞酸菌屬、亞利桑那菌屬與沙門菌屬的鑒別。
(2)方法：將待試菌接種于ONPG肉湯中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h，觀察結果。
(3)結果：呈現亮黃色為陽性，無色為陰性。
(4)應用：可用于遲緩發酵乳糖細菌的快速鑒定，本法對于迅速及遲緩分解乳糖的細菌均可短時間內呈現陽性。埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬、哈夫尼亞菌屬、沙雷菌屬和腸桿菌屬等均為試驗陽性，而沙門菌屬、變形桿菌屬和普羅威登斯菌屬等為陰性。
5．VP試驗
(1)原理：測定細菌產生乙酰甲基甲醇的能力。某些細菌如產氣腸桿菌，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸進一步脫羧形成乙酰甲基甲醇。在堿性條件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，進而與培養基中的精氨酸等含胍基的物質結合形成紅色化合物。即V-P試驗陽性。
(2)方法：將待檢菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水中，35℃孵育24~48h，加入50g/Lα－萘酚（95％乙醇溶液）0.6ml，輕輕振搖試管，然后加0.2ml 400g/L KOH，輕輕振搖試管30s至1min，然后靜置觀察結果。
(3)結果：紅色者為陽性，黃色或類似銅色為陰性。
(4)應用：主要用于大腸埃希菌和產氣腸桿菌的鑒別。本試驗常與MR試驗一起使用，一般情況下，前者為陽性的細菌，后者常為陰性，反之亦然。但腸桿菌科細菌不一定都這樣規律，如蜂房哈夫尼亞菌和奇異變形桿菌的VP試驗和MR試驗常同為陽性。
6．膽汁七葉苷水解試驗
（1）原理：在10%~40％膽汁存在下，測定細菌水解七葉苷的能力。七葉苷被細菌分解生成的七葉素，七葉素與培養基中的枸櫞酸鐵的二價鐵離子發生反應形成黑色化合物。
(2)方法：將被檢菌接種于膽汁七葉苷培養基中，35℃孵育18~24h后，觀察結果。
(3)結果：培養基完全變黑為陽性，不變黑為陰性。
(4)應用：主要用于鑒別D群鏈球菌與其它鏈球菌的區別，以及腸桿菌科的某些種、某些厭氧菌（如脆弱擬桿菌等）的初步鑒別。D群鏈球菌本試驗為陽性。
7．淀粉水解試驗
(1)原理：產生淀粉酶的細菌能將淀粉水解為糖類，在培養基上滴加碘液時，可在菌落周圍出現透明區。
(2)方法：將被檢菌劃線接種于淀粉瓊脂平板或試管中，35℃孵育18~24h，加入革蘭碘液數滴，立即觀察結果。
(3)結果：陽性反應，菌落周圍有無色透明區，其它地方藍色；陰性反應，培養基全部為藍色。
(4)應用：用于白喉棒狀桿菌生物型的分型，重型淀粉水解試驗陽性，輕、中型陰性；芽胞桿菌屬菌種和厭氧菌某些種的鑒定。
8．甘油復紅試驗
(1)原理：甘油可被細菌分解生成丙酮酸，丙酮酸脫去羧基為乙醛，乙醛與無色的復紅生成醌式化合物，呈深紫紅色。
(2)方法：取被檢菌接種于甘油復紅肉湯培養基中，于35℃孵育，觀察2~8d。應同時做陰性對照。
(3)結果：紫紅色為陽性，與對照管顏色相同為陰性。
(4)應用：主要用于沙門菌屬內各菌種間的鑒別。傷寒沙門菌、甲（丙）型副傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、孔道夫沙門菌和仙臺沙門菌本試驗為陰性，乙型副傷寒沙門菌結果不定，其它不常見沙門菌多數為陽性。
9．葡萄糖酸氧化試驗
(1)原理：某些細菌可氧化葡萄糖酸鉀，生成α-酮基葡萄糖酸。α-酮基葡萄糖酸是一種還原性物質，可與班氏試劑起反應，出現棕色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)方法：將待檢菌接種于葡萄糖酸鹽培養基中(1ml)，置35℃孵育48h,加入班氏試劑1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷卻，觀察結果。
(3)結果：出現黃到磚紅色沉淀為陽性。不變或仍為藍色為陰性。
(4)應用：主要用于假單胞菌的鑒定和腸桿菌科菌分群。
二、氨基酸和蛋白質的代謝試驗
1．硫化氫試驗
(1)原理：某些細菌能分解含硫氨基酸生成硫化氫，與亞鐵離子或鉛離子結合形成黑色沉淀物。
(2)方法：將待檢菌接種于含硫化物及亞鐵離子的培養基或克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）中，35℃孵育18~24h，觀察有無黑色沉淀出現。或用醋酸鉛紙條，懸掛于KIA管中（白色濾紙，根據試管大小裁剪適當，在熱的50g/L醋酸鉛飽和水溶液中浸泡，然后于50~60℃烘干，121℃15min高壓滅菌備用）。醋酸鉛是最敏感的方法。
(3)結果：有黑色沉淀物為陽性。
(4)應用：主要用于鑒別腸桿菌科細菌，如沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、愛德華菌屬等為陽性，其它菌屬大多為陰性。但沙門菌屬中亦有部分硫化氫陰性菌株，如甲型副傷寒、仙臺、豬霍亂沙門菌等。
2．明膠液化試驗
(1)原理：細菌分泌的胞外蛋白水解酶（明膠酶）能分解明膠，使明膠失去凝固能力而液化。
(2)方法：將待檢菌接種于明膠培養基中，35℃孵育24h到7d或更長時間，每24h取出放入4℃冰箱約2h后，觀察有無凝固。
(3)結果：如無凝固，則表示明膠已被水解，液化試驗陽性。如凝固，則繼續培養。
(3)應用：奇異變形桿菌、普通變形桿菌、沙雷菌屬和陰溝腸桿菌等到能液化明膠，腸桿菌科中的其它細菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外，許多假單胞菌也能產生明膠酶而使明膠液化。
3．吲哚試驗（靛基質試驗）
(1)原理：某些細菌有色氨酸酶，能分解色氨酸產生吲哚，吲哚與對二甲氨基苯甲醛形成紅色的玫瑰吲哚。
(2)方法：將待檢菌接種于富含色氨酸的蛋白胨水培養基中，35℃孵育24~48h，加入靛基質試劑，觀察結果。
(3)結果：紅色為陽性，無色為陰性。
(4)應用：主要用于腸桿菌科細菌的鑒定，如大腸埃希菌與產氣腸桿菌，肺炎克雷伯菌和產酸克雷伯菌等的鑒別。
4．苯丙氨酸脫氨酶試驗
(1)原理：測定細菌是否產生苯丙氨酸脫氨酶。細菌產生的苯丙氨酸脫氨酶使苯丙氨酸脫氨后生成苯丙酮酸，加入三氯化鐵試劑后產生綠色反應。若延長時間，會引起退色。
(2)方法：將待檢菌大量接種入苯丙氨酸培養基中，35℃孵育18~24h，滴加100g/L三氯化鐵試劑4~5滴，立即觀察菌落生長處有無綠色出現。
(3)結果：有綠色出現為陽性。
(4)應用：變形桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬均為陽性，腸桿菌科其它細菌均為陰性。
5．氨基酸脫羧酶試驗
(1)原理：某些細菌可產生氨基酸脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培養基變為堿性，可用指示劑指示出來。
(2)方法：將待檢菌分別接種于1支氨基酸（賴氨酸，鳥氨酸或精氨酸）脫羧酶試驗管和1支氨基酸脫羧酶對照管（無氨基酸），各覆蓋至少0.5cm高度的無菌石蠟油，35℃孵育1~4d，觀察結果。
(3)結果：若為溴甲酚紫指示劑，則試驗管紫色為陽性，黃色為陰性，對照管應為黃色。
(4)應用：主要用于某些細菌種間的鑒別，如賴氨酸用于產氣腸桿菌（陽性）與陰溝腸桿菌（陰性）；鳥氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和克雷伯菌（陰性）；精氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和產氣腸桿菌（陰性）等。
6．精氨酸雙水解酶試驗
(1)原理：精氨酸經兩次水解后,生成鳥氨酸、氨及二氧化碳。鳥氨酸又在脫羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均為堿性物質，故可使培養基變堿，用指示劑指示出來。
方法：將待檢菌接種于試驗培養上，置35℃孵箱孵育1~4d，觀察結果。
結果：溴甲酚紫指示劑呈紫色為陽性，酚紅指示劑呈紅色為陽性。黃色為陰性。
應用：主要用于腸桿菌科及假單胞菌屬的鑒定。
7．尿素酶試驗
(1)原理：某些細菌能產生尿素酶，分解尿素產生大量的氨，使培養基變堿。
(2)方法：將待檢菌接種于含有尿素的培養基中，35℃孵育18~24h，觀察結果。
(3)結果：紅色為陽性，不變為陰性。
(4)應用：主要用于腸桿菌科變形桿菌屬、普羅威登菌屬、克雷伯菌屬及假單胞菌屬的鑒定。
8．霍亂紅試驗
(1)原理：霍亂弧菌分解色氨酸生成吲哚，并能使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，當加入硫酸后生成亞硝酸吲哚，呈紅色反應。
(2)方法：將待檢菌接種于蛋白胨水中，置35℃孵育24h，加入濃硫酸數滴，觀察結果。
(3)結果：呈紅色者為陽性。
(4)應用：霍亂弧菌呈陽性反應，但本試驗并非霍亂弧菌所特有。凡能產生吲哚并還原硝酸鹽為亞硝酸鹽的細菌，均可呈現陽性反應。
