番茄褐色皺果病毒試紙條
將一片西紅柿葉子在滴管里擠出汁液,并適當加水稀釋,然后輕輕放入一片試紙條,大約10秒之后,該紙條上清晰地出現了兩道暗紅色的橫條,這是該葉子感染了番茄褐色皺果病毒(tomato brown rugose fruit virus,簡稱ToBRFV)的標志。
這一幕是在山東農業大學植物病毒學研究室發生的。近日,科技日報記者來到該實驗室時,實驗室負責人、植物病毒學專家李向東教授告訴記者:“這是我們實驗室剛剛制備的番茄褐色皺果病毒試紙條。相對于其它檢測手段,它靈敏度高、特異性強、使用方便、操作簡單,非常適合田間大批量樣品檢測,對病毒的精準監測及早期預警有重要作用。”
番茄褐色皺果病毒是一種新發病毒,可通過種子、接觸以及熊蜂傳播,嚴重威脅番茄的安全生產。ToBRFV首先報道于約旦、以色列,隨后相繼在美洲、歐洲、非洲等國家出現,引起國際上廣泛重視,多個國家將其列入檢疫對象。
今年4月9日,我國農業農村部和海關總署聯合發布的《中華人民共和國進境植物檢疫性有害生物名錄》也將ToBRFV列為檢疫對象。
快速鑒定及早期預警對ToBRFV的防治十分關鍵。目前的ToBRFV檢測方法包括多重PCR、熒光定量等,均需要精密儀器或專業的操作人員。而李向東實驗室研制的膠體金免疫試紙條操作簡單,可在幾秒或者幾分鐘內通過肉眼觀察進行判斷,對于田間檢測十分適用。
據李向東介紹,他們實驗室以ToBRFV粒子為免疫原,通過雜交瘤技術制備了17株抗ToBRFV的單抗,將2個單抗分別固定于膠體金墊和硝酸纖維素膜上進行組合,制備膠體金試紙條,獲得272個配對組合。通過特異性測定,篩選到一組配對抗體制備的試紙條。試紙條可從稀釋12800倍的番茄葉片病汁液中(含約8微克番茄葉片)檢測到ToBRFV,快速而且靈敏,而與其它同屬煙草花葉病毒屬、氨基酸一致率超過85%、同樣侵染番茄的番茄斑駁花葉病毒、番茄花葉病毒等毫無反應。
“我們同時在辣椒上做了實驗,結果同樣理想。目前,該成果已經申請國家發明ZL,并被山東、河北、河南、江蘇、安徽等地農技推廣部門和企業試用。”李向東說。
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