■ 終點法分析，轉染約72h后通過細胞增殖試劑盒WST-1分析確定細胞活性（圖3）。與X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent相比，其他試劑轉染細胞后，顯著降低代謝活力，顯示出細胞毒性效應。
圖3：比較羅氏X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP 與其試劑轉染細胞后，細胞活力的百分比。WST-1試劑盒檢測得出數值，并以X-tremeGENE 9組結果進行標準化。
轉染效率
■ 為獲得X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent及其他試劑轉染后，表達GFP的細胞數目，Cellavista在指定時間點記錄熒光圖像（圖4）。并利用Cellavista圖像分析軟件，根據GFP陽性細胞面積（熒光圖像）與總的細胞面積（相應的可見光圖像，未顯示）進行定量，數據參見圖5。在觀察過程中得出，X-tremeGENE試劑有更高的轉染效率。
圖4 ：X-tremeGENE Transfection Reagent轉染的細胞表達大量GFP。轉染48h后，Cellavista記錄的細胞表達GFP的熒光圖像（10倍放大）。
圖5：GFP表達水平定量。Cellavista分析軟件統計轉染后24h、48h和72h后的轉染效率百分數（以X-tremeGENE 9 Transfection Reagent轉染24h后獲得的值進行標準化）。
總結
X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent在Hela細胞系的檢測實驗上，表現出低細胞毒性和高DNA轉染效率。xCELLigence RTCA MP也是理想的適合實時檢測試劑特異性效應的儀器。
材料和方法
細胞培養
Hela細胞（ATCC）接種在合適的含附加成分的細胞培養基中，并在37℃，5%CO2 濕潤環境下培養。細胞用胰蛋白酶消化、清洗并接種在E-Plate VIEW 96上。
轉染
接種24小時后，分別用三種轉染試劑X-tremeGENE 9、X-tremeGENE HP以及其他試劑（LTX和L2K），轉染CMV啟動子的GFP-pcDNA3.1質粒。轉染根據指導手冊說明，采用各說明書建議的最適DNA與轉染試劑比例。所有實驗重復三次。
實時細胞分析
xCELLigence RTCA MP儀器連續監測實驗全程細胞狀態（從細胞接種到轉染后三天）。測定每孔50 μl 細胞培養基的值作為背景電阻抗。每孔最終體積調整至100 μl，密度為4000個Hela細胞。接種后，電阻抗以固定時間間隔被測定。細胞指數（CI）值以轉染時進行標準化。
自動成像
Cellavista系統高通量顯微鏡可在實驗過程中指定時間點進行操作。xCELLigence 系統測定可短暫暫停，E-Plate VIEW 96可轉化進Cellavista系統中。通過10倍物鏡可獲得所有96孔板的可見光和熒光圖像。轉染效率可使用Cellavista軟件分析獲得。獲取圖像后，E-Plate VIEW 96返回xCELLigence RTCA MP儀器中，細胞電阻測定可重新開始。
WST-1 分析
細胞活性可使用WST-1細胞增殖試劑盒(羅氏應用科學)在實驗終點測定（轉染后72小時），參見操作說明。
英文原文：