小鼠抗核抗體(ANA)定量EIA試劑盒使用說明
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ELISA法。用抗小鼠ANA單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 ANA與單抗結合，加入酶標抗體，形成免疫復合物連接在板上，加入酶底物TMB，出現藍色，加終止液硫酸，顏色變黃，在450nm處測OD值，ANA濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中ANA濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標抗體稀釋液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
10×標本稀釋液（Sample Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
標準品（Standards）：500ng | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
酶標抗體濃縮液(100X) | 120ul | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
準備試劑與收集血樣
1. 收集標本：血清、血漿（肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融。正常標本測定前用標本稀釋液作1：10稀釋（取20ul，加標本稀釋液180ul,稀釋10倍）。
2. 標準品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成1000ng/ml的溶液。設標準管8管，每管加入標本稀釋液300ul。在第一管中加入1000ng/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
4. 酶標抗體濃縮液用酶標抗體稀釋液作1:100倍稀釋（示例：10ul濃縮液+990ul稀釋水）。
5. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測程序
1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。。
3. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃60分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘。
6. 每孔加入100ul終止液混勻。
7. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、0 ng/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。
3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應ANA含量，再乘上稀釋倍數10即可。
試劑盒性能
1. 靈敏度：最小的ANA 檢測濃度小于4ng/ml。
2. 特異性：可同時檢測重組或天然的小鼠ANA。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性：板內、板見變異系數均小于1