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  • 發布時間:2020-02-07 21:11 原文鏈接: 細胞形態異常,魚骨圖來幫忙(三)

    那么我們繼續分析
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    根據魚骨圖魚刺大小所代表的問題發生概率大小,接下來我們來談談實驗操作過程中,有哪些因素會影響到我們的實驗結果呢?

    操作過程

    操作過程又可細分為以下幾類:

    操作人員

    人體皮膚表面平均帶有103~106/cm2的微生物,污染物可能由于操作人員及穿著衣物帶入。進出細胞房需穿著合適的實驗衣及更換專用的拖鞋,盡量降低粉塵、皮屑及附帶之微生物的揚起及掉落,以免造成污染。

    解決方案:

    人體是細菌最大的攜帶者,進出細胞房應該這么做:

    1. 換專用實驗衣:勤更衣,無菌無塵衣穿過六小時后,已可在每平方公分中采集到1-6個微生物。

    2.戴口罩:減少講話,因為口水中含107個微生物/ml,并且寄居在人體部分的支原體也會隨之影響實驗環境所以應戴口罩操作。

    3.戴手套:進入細胞房之前,應去除身上配戴所有與實驗無關的隨身物品,洗手,消毒,戴上手套,再使用75%酒精消毒。

    細胞房出入口

    無凈化的室內空氣可檢測到浮游菌500~2000顆/cm3

    2015藥典指導原則《9205藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則》中,有規定不同潔凈等級實驗室的浮游菌和沉降菌數量要求。

    解決方案:

    1. 按要求細胞房應為封閉、正壓、潔凈房間(1-10萬級潔凈度)。如受限于現況,可考慮醫療用移動式空氣凈化機,以凈化空氣。

    2.如擔心污染物外泄,細胞房還應設計為相對負壓。

    3.人員進出細胞房應有管制,經過培訓才能進入操作,避免污染別人。

    4.細胞房窗戶不建議打開!打開窗戶,許多細菌會乘機夾雜在空氣中進入細胞房里。

    ★細胞房內絕對不可穿拖鞋或涼鞋,以避免帶入腳氣霉菌。應該穿全包裹式鞋套或專用鞋子

    生物安全柜

    生物安全柜需盡量保持清潔及凈空,非必要性的物品不要放在里面,容易擾亂操作柜內氣流。使用前一定要使用消毒殺菌溶液進行擦拭[如75%酒精或Pharmacidal(不需擦拭,自然風干)],實驗過程中,若出現液體飛濺的情況,應當馬上用消毒劑擦拭;使用后需要進行消毒并且UV處理20分鐘以上。生物安全柜與超凈工作臺的高效濾網(HEPA filter)滋生細菌后反而容易成為污染源,良好的操作環境,才能確保細胞的健康。

    解決方案:

    1. 定期更換生物安全柜與超凈工作臺HEPA濾網,檢測風速與測漏。

    2.開始實驗前,必須對超凈臺進行全面消毒,整個機柜表面進行擦拭,使用前先打開安全柜通風系統,流通空氣,直到原有的內部濁氣都被排出。

    3.實驗過程使用明火容易導致生物安全柜氣流紊亂,非必要時應該盡量避免。

    顯微鏡置物臺

    顯微鏡頻繁地與不同細胞系接觸,使顯微鏡也成了污染的高發地;使用顯微鏡觀察細胞時,放置細胞培養皿或是培養瓶的載物平臺與桌面,使用前后需要進行消毒,并保持干凈,以免造成交叉污染。

    二氧化碳培養箱

    培養箱內的CO2、濕度和溫度都需要定期校準,避免對細胞提供過低或過高的二氧化碳濃度和不當的濕度與溫度;培養箱的環境非常適合微生物生長,所以水盤使用的水需滅菌并加入抑菌劑,且定期清潔擦拭培養箱體腔與不銹鋼架,杜絕微生物滋生。

    解決方案:

    1. 選購可滅菌的二氧化碳培養箱,定期滅菌消毒。

    2.避免將培養箱直接置于地面上,需要使用支架或置于實驗桌上。如果培養箱直接放在地面上,每次打開門時產生的空氣流動,會增加污垢、灰塵和污染物進入培養箱的機率。

    3.培養箱的開門時間能短則短,開門次數越少越好,減少空氣傳播的污染物流入。

    4.應避免在培養箱中有震動或是周圍有離心設備,尤其細胞剛傳代或是復蘇時,如受到震蕩搖晃會造成貼壁遲緩,甚至會有聚集成團的狀況。

    水浴鍋

    水浴鍋常年潮濕,是細胞房中較容易滋生細菌及真菌的設備,需要定時清潔;污染源容易在細胞復蘇、培養基或無菌試劑回溫的過程中,粘附瓶身水滴并帶入超凈工作臺中。

    解決方案:

    1.定期消毒更換水,水浴鍋中應使用無菌超純水,并加入抑菌劑。

    2.水浴回溫時,必須確保容器的瓶蓋不與水接觸;因為污染源可能會在此時通過瓶蓋的縫隙順勢留在瓶口。

    3.水浴回溫后必須確保容器表面擦干,75%酒精消毒后再放進生物安全柜。

    4.水浴鍋使用結束后,要記得將水浴鍋蓋子蓋上,避免空氣灰塵落入。

    滅菌鍋

    滅菌鍋及相關設備,都需要定時保養與校準以維持其正常性能,避免滅菌效果不達標。

    解決方案:

    定期做BD(Bowie Dick)測試,確保壓力、溫度與時間均符合滅菌要求。

    離心機

    離心機是細胞實驗最常使用儀器, 離心機內部的小縫隙也是藏污納垢之處,容易發生交叉污染的重災區,會發生污染的重點懷疑對象。

    解決方案:

    定期清潔離心機內部的轉子和腔室。

    文章來源:http://tech.xpbiomed.com/

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