1、臨床損害特征 臨床上往往僅見一紅色創面或糜爛面，若能用探針無阻力地伸入到上皮下方或鄰近的黏膜表層下方，尼氏征陽性，或揭皮試驗陽性則有助于診斷，但不要大范圍地采用揭皮試驗，以免增加患者的痛苦。患者的全身情況表現為體質下降，甚至亞病質，也有助于診斷。此外，下列方法有助于正確診斷。
2、細胞學檢查 局部消毒后將早期新鮮的大皰剪去皰頂，輕刮皰底組織，涂于玻片上，干燥后用吉姆薩或赤蘇木精-伊紅染色，可見典型的棘層松解的解體細胞。該細胞核大而圓，染色深，胞漿較少，又名天皰瘡細胞或棘層松解細胞，這類細胞量的多少與病情輕重相關。
3、活體組織檢查 在病損附近，用口鏡柄按揉起皰，然后切取該部位上皮及其下方組織。
4、免疫學檢查
（1）免疫組織化學：免疫熒光法直接法顯示棘細胞層間的抗細胞粘接物質的抗 體。
（2）血清抗體物質的檢測：免疫熒光間接法是檢測患者血清中存在的抗基底細胞的細胞漿內、棘細胞層的細胞間質以及棘細胞內的循環抗體，一般抗體效價為1:50時即有意義。