熒光定量PCR中溶解曲線的意思

溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關系，擴增什么基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似于電泳。那么你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關系。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組DNA污染的峰會在90℃以后。出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因（也有可能是從加完反應液到上機開始PCR這之間的時間過長）所致；基因組DNA那么考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gDNA的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板污染，注意實驗操作等避免模板污染。