結果與討論
從Agilent 1100系列HPLC系統到ACQUITY Arc系統的HPLC肽圖方法轉換實現了方法等效性
為了評估肽圖方法從Agilent 1100系列HPLC系統轉換到ACQUITY Arc系統時的方法等效性，我們采用如上所述的方法參數建立了英夫利昔單抗的肽圖。根據以前的評估結果，我們在
ACQUITY Arc系統中配置了一個主動預加熱器(CH-30A)，以確保兩個系統可實現相當的溫度控制水平5。首先在Agilent 1100系列HPLC系統上運行分離，建立一個基準結果(圖1A)。然后，維持所有方法參數不變，將該方法轉換至ACQUITY Arc系統。實驗結果表明，兩個系統之間存在185 μL的梯度補償體積。因此我們在進樣之后應用Gradient SmartStart技術6來補償兩個系統之間的延遲體積差異。該功能可相對于進樣對梯度進行調節，而無需更改梯度表。ACQUITY Arc系統所得的色譜圖如圖1B所示。兩個系統生成的色譜圖顯示出良好的一致性。
圖1：圖1. 英夫利昔單抗的肽圖對比，分別采用A)Agilent 1100系列HPLC系統和B)應用了梯度補償的ACQUITY Arc系統采集數據。實驗計算了所有標記峰的相對保留時間。色譜峰的選擇由洗脫位置和強度決定。相對保留時間依據峰1計算。
為進一步評估結果的可比性，我們研究了保留時間。表1列出了52個峰的保留時間，兩個
系統所得的對應色譜峰的保留時間之間略有差異，而對應色譜峰的相對保留時間之間的
差異小到可以忽略不計。借助采用GradientSmartStart技術的流路1，我們在不改變任何方
法參數的前提下成功地將HPLC方法轉換到了現代LC平臺上。
表1. 比較圖1中Agilent 1100系列HPLC系統和ACQUITY Arc系統鑒定出的52個色譜峰的保留時間。采用Gradient SmartStart技術補償兩個系統之間的延遲體積差異。通過計算所得的
_值可以看出，由補償體積造成的相對保留時間差異幾乎可以忽略不計。