重組蛋白作為生物制藥在醫學中作用顯著,一般用轉基因動物的乳腺產生。重組蛋白真核表達包括酵母表達系統、桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統、腺病毒表達系統等。一般可以正確折疊,包含各種修改。但是價格高,周期長。
重組蛋白真核表達系統技術平臺的特色
快速、highly-stringent篩選:只篩選到高表達穩定株;4~5個月獲得穩定高表達細胞株(常規方法要9~12個月)
高效表達:超強啟動子和超強分泌信號肽,很容易達到30p/c/d/以上(傳統方法需要用藥物篩選9~11輪以上才能達到)
穩定表達:表達質粒上的AGE穩定子,能夠抑制染色體gene silencing,保障細胞株的長時間穩定表達
用GS篩選:質粒上有谷氨酰胺合成酶(GS)基因,可以做為備選篩選標記,也可以直接用MSX加壓篩選,顯著提高重組蛋白的表達產率;
高產率:單克隆細胞株在普通搖瓶里的蛋白表達量已能達到1.5~2克/升
工藝放大優化潛力:經工藝放大優化(Process Development)后,蛋白產量可提高5-10倍以上。本表達系統可容易達到3~5克/升的蛋白的產量。較大地節約生產成本。
目前的表達系統各有利弊,但一般理想的表達系統滿足以下幾點:一是特異性,不受其他內源性因素影響,只能通過外源性無毒物激活。二是不干擾,不干擾細胞通路。以及誘導劑的誘導性、生物利用度、可塑性和劑量依賴性。
因此,在選擇表達系統時,必須充分考慮各種因素,如蛋白質性質、實驗條件、生產成本、表達水平和安全性。權衡利弊后,選擇相應的表達系統。
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