一文了解電鏡固定液選擇及配制

　　自1931世界上第一臺電子顯微鏡誕生以來，微觀世界的大門開放的更加廣闊。目前電鏡被廣泛運用于各器官系統疾病的病理診斷中，除了運用在腫瘤的診斷與鑒別診斷中，用得最多的是腎臟活檢和某些皮膚疾病的診斷，其中透射電子顯微鏡是最早，最廣泛應用于醫學領域的一種電鏡。隨著電鏡在醫學上的應用，人類通過觀察細胞膜和細胞漿內的各種細胞器和細胞核的細微結構及其病理變化，由此產生了亞細胞結構病理學（substructural pathology），又稱超微結構病理學（ultrastructural pathology）。

　　電子顯微鏡

　　下面主要介紹電鏡生物樣品固定液的選擇及其配方：

　　1、緩沖液的配制

　　在配制固定液之前，應先配制緩沖液。

　　0.2M磷酸緩沖液的配制：

　　磷酸二氫鈉（NaH2PO4.H2O） 2.6g

　　磷酸氫二鈉（Na2HPO4.12H2O） 29g

　　重蒸餾水加至500ml

　　調pH至7.4

　　2、（灌注）固定液的配制

　　4%多聚甲醛：用0.2M磷酸緩沖液配制，重蒸餾水補足容積。

　　4%多聚甲醛+（0.5-2%）戊二醛，以4%多聚甲醛+1%戊二醛為例，配方如下：

　　0.2M磷酸緩沖液的配制 100ml

　　25%戊二醛（電鏡專用） 4ml

　　重蒸餾水加到200ml

　　多聚甲醛和戊二醛混合固定液配制方法：

　　（1）4%多聚甲醛+5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25ml雙蒸水中，80℃水浴，搖動使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷卻后加10ml 25%戊二醛，再加15ml 0.2PB，調pH備用。此固定液中含多聚甲醛4%，戊二醛5%，屬高滲液，但固定效果不錯，尤其對細胞內的微管保存較好。

　　（2）2%多聚甲醛+2%戊二醛：溶解1g多聚甲醛于25ml雙蒸水中，80℃水浴，搖動使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷卻后加4ml 25%戊二醛，再加21ml 0.2PB，調pH備用。常規固定選用這種配方。

　　（3）4%多聚甲醛+0.5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25ml雙蒸水中，80℃水浴，搖動使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷卻后加1ml 25%戊二醛，再加24ml 0.2PB，調pH備用。推薦用作免疫電鏡標本固定劑，對于抗原較強的標本，可將濃度降低到2%多聚甲醛+0.25%戊二醛。