乳制品中核苷酸分析

乳粉中添加尿苷酸（UMP）、胞苷酸（CMP）、腺苷酸（AMP）、鳥苷酸（GMP）、肌苷酸（IMP）等多種核苷酸，用來提高嬰兒的免疫調節功能和記憶力。
 

核苷酸分析目前存在的挑戰：

由于核苷酸極性很大，用反相色譜柱很難達到很好的保留和分離，所以為了提高核苷酸的保留往往會嘗試離子對色譜方法，離子對色譜方法存在以下問題：

1.容易起泡，管路中有氣泡，影響分析

2.平衡時間長，延長了分析工作時間

3.難以清洗，對色譜柱有損傷

4.易變質，容易堵塞管路，損傷儀器

沃特世公司（Waters?）解決方案：

1.避免使用離子對試劑，僅需要使用揮發性乙酸銨、乙腈體系

2.建議使用Oasis? HLB SPE 小柱利用通過凈化方式進行乳粉樣品前處理，提供更潔凈的樣品，提高靈敏度、延長色譜柱及儀器壽命

3.使用Amide色譜柱分析，用一般反相流動相保留極性化合物，方法簡單快速

實驗結果及色譜圖

5種核苷酸混合標準品的6針連續進樣分析結果


 

實際樣品6針連續進樣分析圖譜
 

小結：

本實驗采用Waters ACQUITY UPLC?  H-Class 系統，BEHTM Amide 1.7μm
2.1*100mm色譜柱，對嬰幼兒奶粉中的5種核苷酸進行分析方法的開發，實驗結果表明：
 

1.在Waters ACQUITY UPLC H-Class 系統上，采用BEH Amide 1.7μm 2.1*100mm色譜柱能迅速分離奶粉中5種核苷酸標準品，且5種化合物的分離度均在3.0以上；對于實際的奶粉樣品，5種核苷酸樣品及雜質之間的分離度均在1.6以上。

2.該分析方法重現性好。其中，奶粉樣品6次連續進樣分析結果中，5種核苷酸保留時間RSD值均小于0.12%。 

3.Waters ACQUITY UPLC H-Class 系統，具有四元溶劑的Auto?Blend PlusTM功能，因此，在該系統上進行方法開發非常靈活、方便，節約了溶劑配置的大量時間，大大提高了實驗的效率，從而大幅度的降低了實驗的溶劑消耗，降低了實驗成本。