焦磷酸測序復性和準確性可與Sanger測序法媲美

　　在Sanger測序問世后約20年的時間里，幾乎所有的核苷酸序列都是由其測出來的。但是其通量已經達到了極限，每個反應步驟需花費很長時間，難以實現基因組水平的大規模測序。另外，在實際工作中，需要對已知序列的DNA片段進行重新測序，而這種分析往往需要檢測幾十個堿基即可。在這種情況下，花費數十小時獲取幾百個堿基的數據就沒有太大的意義了。

　　焦磷酸測序是一種由DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、熒光激素酶和三磷酸腺苷雙磷酸酶催化的新型酶級聯化學發光測序技術，通過對DNA合同反應中稀釋的生物光信號完成實時檢測，開創了邊合成邊測序的先河。引物和單鏈模板DNA退火后，在DNA聚合酶的作用下催化dNTP的聚合反應。若dNTP與模板配對，DNA聚合酶將其摻入到引物延申鏈中，并釋放等摩爾數的焦磷酸（PPi）。在三磷酸腺苷硫酸化酶催化的作用下，無機焦磷酸轉變為ATP。在ATP存在的情況下熒光素酶催化熒光素氧化產生光信號，并被高靈敏度的CCD實時檢測。ATP和未摻入的dNTP由三磷酸腺苷雙磷酸酶降解，淬滅光信號，并再生反應體系。dNTP的聚合反應與光信號的釋放偶聯起來，一一對應，最終通過對熒光信號及其峰值的讀取實現待測DNA模板準確、快速、實時測序。焦磷酸測序技術無需任何特殊形式的熒光標記，無需電泳，操作極為簡便，測序速度也得到了很大的提升。其測序的重復性和準確性可與Sanger測序法媲美，而速度快100倍，尤其適用于已知DNA短序列（20-50bp）進行快速測序。