你的小鼠有資格進SPF級動物房嗎？

中國和美國的實驗室也許能夠找到幾乎一樣的SPF小鼠，卻沒人敢保證可以在上海和紐約的寵物店買到同樣的“臟鼠”？似乎干凈的小鼠都是一致的，而污染的小鼠卻各有各的疾病。試想如果將這些“臟鼠”作為模式生物，不穩定的性狀和難以重復的實驗數據的定會令人頭疼。因此穩定的---SPF小鼠對于科研筒子們來說至關重要。

很多人肯定有這樣的疑問，面對美國jax或者其他動物房來源的小鼠，路途跋涉，如何保證小鼠干凈并順利進入SPF動物房呢？照個紫外，滅滅菌傳遞進去就好了？然而事情似乎遠遠比我們想象的要復雜，下面就一起跟隨著小鼠感受一下它所經歷的考驗吧。

SPF級動物房系統

為了保證小鼠的健康和疾病預防，一般外來小鼠必須經過隔離和凈化才能進入如上圖所示的SPF級動物房內生活。原來小鼠過上養尊處優的生活也是蠻不容易的呢！

隔離和凈化目的：疾病防疫，防止鼠群感染

作為實驗動物，實驗前必須要確定健康無病，一般國內外最廣泛使用的即SPF級，指體內無特定的微生物和寄生蟲存在的動物，實際上在指無傳染病的健康動物。為了避免實驗小鼠群體被感染疾病，保持鼠群的健康，必須對外來小鼠做好疾病預防工作。

1、什么是隔離？

將進出境或國內調運的有關動物在檢疫機關指定的場所內，于隔離條件下進行飼養，并在其生長期間進行檢驗、檢測和處理的一項措施，通過隔離檢疫可以避免或減少前期微生物風險預評中的漏檢問題，更為有效的控制有害生物的輸入或輸出。

隔離環境：以隔離器為主體及其它附屬裝置組成的飼養系統，是獨立通風飼養系統、進入的全新風潔凈度達100級，無菌并維持正壓狀態，一切物品都要嚴格滅菌后經傳遞窗送入，操作時，工作人員只能通過隔離器上的橡膠手套來進行飼養或實驗。

隔離器系統

隔離的步驟：

按規定，凡進口小鼠，必須在隔離室進行檢疫觀察飼養1個月，隔離結束后，根據實驗需求繼續國內配送小鼠或轉入凈化、代繁部門。

隔離分為兩種：

① 輸入隔離：進口小鼠

如直接引進JAX來源小鼠，必須隔離器滿1個月，并提供相應的隔離檢疫報

② 輸出隔離：出口小鼠

小鼠進入隔離器隔離，一個月內，按照出入境及外方檢疫要求安排微生物檢測，出具檢測報告，以備出口單證使用

2、什么是凈化？

針對于外來小鼠需要進入無菌動物房，由于各種原因如接觸到外界環境，小鼠可能被病原體感染，為了保證小鼠健康，干凈凈地順利進入動物房，必須經過凈化這一步。如下：

凈化目前的技術主要是：體外受精--胚胎移植(IVF-ET)技術

體外受精（In Vitro Fertilization, IVF）和胚胎移植（Embryo Transfer,ET）

IVF-ET技術基本原理：小鼠自身雖然可能被感染，但是小鼠的精子或卵細胞在體內是干凈無菌，借用體外受精這項輔助生殖技術，將雄性小鼠精子和雌鼠的卵細胞交配得到受精卵后，再“借腹生子”移植到代孕小鼠，得到您需要更多的SPF級小鼠。

隨著基因修飾的小鼠大量涌現，我們卻經常面臨著小鼠數目不夠，如從國外代購的小鼠只有4-5只，或者友情贈送2只轉基因小鼠，這樣的數量很多時候無法滿足我們實驗的需求，IVF技術既可以滿足小鼠凈化，又可以獲得更多轉基因小鼠。

下面我們以這類基因修飾的小鼠為例，假設只提供雄鼠為例，介紹凈化步驟：

（IVF-ET技術具體步驟可參考我們往期的實驗技巧文章2.4和2.8）

注意，凈化基因修飾小鼠有幾種情況：

① 如果提供的是雄性小鼠，一般2-3只，一般得到的是雜合子，周期：2-3個月，

如果還需要得到純合子，周期更長，大概5-6個月

② 如果提供雄性（2-3只）和雌性小鼠（10只以上），獲得純合子，周期：2-3個月

體外受精技術優點：

目前小鼠體外受精、胚胎移植技術已經是相當成熟, 有時只需要一只雄鼠，超排技術獲得大量的卵后,就能進行體外受精和胚胎移植, 既可節省動物, 也可加速生物凈化節奏。

特別是針對基因編輯小鼠：大多數的轉基因、敲除或者單基因突變的品系多半呈現生育和哺育幼仔能力低下，IVF-ET技術既可達到凈化目的, 又加速種群的繁殖。

鑒于此，您完全不用再擔憂您的小鼠不夠干凈或者數目不夠，只要經過了隔離或者凈化，您的小鼠就有資格進入動物房進行試驗了，就不怕得不到可靠的實驗數據了。