做微生物的你，這些微生物培養與分離的方法你知道嗎

發布時間：2019-05-22 10:22 原文鏈接：做微生物的你，這些微生物培養與分離的方法你知道嗎

接種與分離方法

根據待檢標本的性質、培養目的和所用培養基的種類，采用不同的接種方法。

1．平板劃線分離培養法

對混有多種細菌，采用劃線分離和培養，使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個菌落，以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法：

①分區劃線分離法：此法常用于含菌量較多的細菌的分離。先用接種環挑取標本涂布于瓊脂平板1區（占培養基總面積的?）并作數條劃線，再于2、3、4區依次劃線。每劃完一個區域，均將接種環燒灼滅菌1次，冷后再劃下一區域，每一區域的劃線均與上一區域的劃線交接1~3次。一個成功分區劃線的平板，培養后分別觀察1區形成菌苔，2區菌落連成線，3區和4區可分離到單個菌落。

②連續劃線分離法：此法常用于含菌量不多的標本或培養物中的細菌分離培養。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕涂抹，然后再用接種環或拭子在平板表面曲線連續劃線接種，直至劃滿瓊脂平板表面。

2.瓊脂斜面接種法

主要用于菌落的移種，以獲得純種進行鑒定和保存菌種等。用接種環（針）挑取單個菌落或培養物，從培養基斜面底部向上劃一條直線，然后再從底部沿直線向上曲折連續劃線，直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養基斜面接種，用接種針挑取待鑒定細菌的菌落，從斜面中央垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上曲折劃線接種。

3．穿刺接種法

此法多用于半固體培養基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養基接種，半固體培養基的穿刺接種可用于觀察細菌的動力。接種時用接種針挑取菌落，由培養基中央垂直刺入至距管底0.4cm處，再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養基，穿刺高層部分，退出接種針后直接劃線接種斜面部分。

4．液體培養基接種法

用于各種液體培養基如肉湯、蛋白胨水、糖發酵管等的接種。用接種環挑取單個菌落，傾斜液體培養管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立后液體淹沒接種物為準）。此接種法應避免接種環與液體過多接觸，更不應在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實驗室污染。

5．傾注平板法

本法主要用于飲水、飲料、牛乳等標本中的細菌計數。取純培養物的稀釋或原標本1ml至無菌培養皿內，再將已融化并冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養基15~20ml傾注入該無菌培養皿內，混勻，待凝固后置37℃培養，長出菌落后進行菌落計數，以求出每毫升標本中所含菌數。先數6個方格（每格為1cm2）中菌落數，求出每格的平均菌落數，并算出平皿直徑，然后按下列公式計數，求出每毫升標本中的細菌數。

全平板菌落數=每方格的平均菌落數×лr2

每ml標本中的細菌數=全平板菌落數×稀釋倍數

6．涂布接種法

本法多用于紙片擴散法藥敏試驗的細菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養基表面，然后用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反復涂布，使被接種液均勻分布于瓊脂表面，然后貼上藥敏紙片，或直接培養，本法經培養后細菌形成菌苔。

細菌的培養方法

根據不同的標本及不同的培養目的，可選用不同的培養方法。通常把細菌的培養方法分為需氧培養、二氧化碳培養、微需氧培養和厭氧培養四種。

1．需氧培養

是指需氧菌或兼性厭氧菌在有氧條件下的培養，將已接種好的平板、斜面、液體培養基等在空氣中置35℃孵育箱內孵育18~24h，無特殊要求的細菌均可生長。少數生長緩慢的細菌需要培養3-7d甚至1個月才能生長。為使孵育箱內保持一定的濕度，可在其內放置一杯水。對培養時間較長的培養基，接種后應將試管口塞好棉塞或硅膠塞后用石蠟-凡士林封固，以防培養基干裂。

2．二氧化碳培養

某些細菌，在初次分離時，須在5%~10%二氧化碳環境中培養才能生長。常用的培養法如下。

①二氧化碳培養箱法：二氧化碳孵箱能自動調節二氧化碳的含量、溫度和濕度，培養物置于孵育箱內閣，孵育一定時間后可直接觀察生長結果。

②燭缸培養法：取有蓋磨口標本缸或玻璃干燥器，將接種好的培養基放入缸內，點燃蠟燭后放在缸內稍高于培養物的位置上，缸蓋或缸口均涂以凡士林，加蓋密閉。因缸內蠟燭燃燒氧逐漸減少，數分鐘后蠟燭自行熄滅，此時容器內二氧化碳含量約占5%~10%。將缸置于35℃普通孵育箱內孵育。

③氣袋法：選用無毒透明的塑料袋，將已接種標本的培養皿放入袋內，盡量祛除袋內空氣后將開口處折疊并用彈簧夾夾緊袋口。使袋呈密閉狀態，執斷袋內已置的二氧化碳產氣管（安瓿）產生二氧化碳，數分鐘內就可達到需要的二氧化碳培養環境，置于35℃孵育箱內孵育。

④化學法：常用碳酸氫鈉-鹽酸法。按每升容積稱取碳酸氫鈉0.4g與濃鹽酸0.35ml比例，分別置容器內，連同容器置于玻璃缸內，蓋緊密封，傾斜缸位使鹽酸與碳酸氫鈉接觸而生成二氧化碳。于35℃孵育箱內孵育。

3．微需氧培養

微需氧菌培養在大氣中及絕對無氧環境中均不能生長，在含有5%-6% 氧氣，5%-10%二氧化碳和85%氮氣的氣體環境中才可生長，將標本接種到培養基上，置于上述氣體環境中，35℃進行培養即微需氧培養法。

4．厭氧培養

厭氧菌對氧敏感，培養過程中需造成低氧化還原電勢的厭氧環境。厭氧培養常用的方法有：物理法、化學法、生物法。如厭氧罐培養法、氣袋法、厭氧手套箱法、需氧菌共生厭氧法等。

細菌在培養基上生長特性

1．固體培養基

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