【1】抗體的說明上，都給出了一個范圍，可以以這個范圍為根據摸索。開始的時候可以把膜剪成幾小塊，每一塊用不同的一抗二抗濃度，這樣就可以比較快的摸出適宜的濃度。有些時候也有一定的經驗的：我用的是SANTA CRUZ的抗體，一抗建議的稀釋比是1：200－1000，我用的是1：400效果挺好的。周圍的人用的這個公司的其他一抗也是建議這個稀釋比，他們也是稀釋成了1：400，效果也挺好的。所以，如果用的是這個公司的一抗，如果建議的稀釋比和上面相同的話，建議先用1：400試一下。
【2】如果背景深，考慮二抗濃度高了，可以降低二抗濃度。當然沒封閉好等很多其他原因也可以引起背景過高。
【3】如果雜帶較多，可以考慮降低一抗的濃度。如果沒有條帶，則可以考慮增加一抗的濃度。
【4】當然，在摸索抗體濃度的同時，要保證其他步驟的完善、合理性：轉膜成功、封閉的要好、上樣量是否合理（不要太大了）等。
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