免疫球蛋白標記技術_熒光素標記抗體技術

抗體

FITCPBSDMSO碳酸鹽緩沖液

攪拌器紫外分光光度計

1.  將純化的IgG抗體對PH9～9.5碳酸鹽緩沖液透析過夜，透析后抗體液移入小燒杯中

　　　　
2.  稱取適量IFTC，加入二甲亞砜（DMSO）（FITC～1 mg/1 ml DMSO），使終濃度為1 mgFITC/1 mlDMSO

　　　　
FITC/IgG比例
如IgG濃度為1 mg/ml，FITC/IgG比例約為50 μgFITC/mgIgG；

如IgG為5～10 mg/ml，則比例為25 μgFITC/ml IgG

在10 ml小燒杯中先放入抗體

3.  按上述比例將FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗體溶液中

4.  將標記物用PBS加至2.5 ml，磁力攪拌器室溫下避光攪拌2 h，用PD10柱（Sephadex G25柱）除去游離熒光素，先用25 ml PBS淋洗G25柱。收集PBS洗脫第一個熒光素結合蛋白峰，測定F/P比值。第二個熒光素峰為游離熒光素。

計算：

　　　2.87×A495

F/P＝────────

　　A280-0.35×A495

合適的F/P值為2～4。

1.  FITC保存于4 ℃暗處，使用前待試劑瓶升至室溫時開蓋稱取，以避免潮解。

　　
2.  FITC-DMSO液要臨用時配制。

　　
3.  碳酸鹽緩沖液要新鮮配制。