免疫細胞化學和免疫熒光實驗

載玻片/蓋玻片處理
聚醚酰亞胺或多聚賴氨酸在室溫下包被蓋玻片1小時。
無菌水沖洗蓋玻片（3次 ，每次5分鐘）。
可將蓋玻片干完全干燥，并在紫外光下消毒至少4小時。
在玻片上種植細胞，或準備細胞離心涂片器，或做好涂抹準備。
磷酸鹽緩沖液（ PBS ）進行簡短的沖洗。

第一步：細胞固定
用預冷的甲醇、丙酮（ 1-10分鐘），或3-4 ％甲醛（PBS的pH值7.4）室溫（或者-20 ℃)固定細胞片15分鐘。
用預冷的PBS沖洗細胞片兩次。透化：如果目的蛋白是胞內表達，透化細胞非常重要。注：丙酮固定標本不需要透化。

用含0.25% Triton X-100或100 μM 洋地黃皂苷 or 0.5% 皂苷的PBS室溫孵育標本10分鐘。Triton X - 100是目前最流行的通透劑，可提高抗體的滲透程度。但這不適合與膜相連抗原的使用，因為它會將膜破壞。
PBS清洗細胞片3次，每次5分鐘。

第二步：封閉和孵育
PBST孵育細胞（1 ％牛血清白蛋白），室溫30分鐘，以封閉抗體非特異性結合位點（封閉液也可以是1 ％明膠或10 ％的血清，此血清需來自二抗產生的物種體內） 。
加入一抗在濕盒內孵育細胞片（在使用含1% BSA PBST稀釋抗體的），室溫1小時或4 ℃過夜。
緩慢倒出溶液，PBS清洗細胞片的3次，每次5分鐘。
加入含1 ％BSA的二抗稀釋液，室溫避光孵育1小時（避光）。
緩慢倒出二抗溶液，PBS清洗3次，每次5分鐘（避光）。

第三步：復染
在0.1-1 μg/ml Hoechst or DAPI (DNA染液)下孵育細胞1分鐘。
PBS清洗。

第四步：封片和觀察
滴加一滴封片劑封片劑質，蓋上蓋玻片。
用指甲油密封蓋玻片，以防止干燥和顯微鏡觀察時移動。
觀察后的細胞片可避光保存在-20或4°C。