關于黃曲霉素的檢測方法

12月24日，蒙牛牛奶被檢出含強致癌物黃曲霉毒素M1。12月26日，蒙牛集團相關負責人表示，造成產品不合格的原因，是當地奶牛飼料因天氣潮濕發生霉變，奶牛在食用這些飼料后，原奶中的黃曲霉毒素超標。而眉山工廠原奶質檢員在前期的原奶檢驗上出現失誤，導致未能檢出黃曲霉素……

送走了三聚氰胺，又迎來了黃曲霉素。看來幾經折騰，民眾的化學知識倒增長了不少。這次我們主要來聊聊黃曲霉素，重點是關于它的檢測方法。

黃曲霉毒素（AFT）是一類化學結構類似的化合物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉、寄生曲霉產生的次生代謝產物，在濕熱地區食品和飼料中出現黃曲霉毒素的機率最高。

下面先送上一張黃曲霉毒素的近照。

黃曲霉毒素主要有B1,B2 ,G1 ,G2 以及另外兩種代謝產物M1 ,M2.其中M1 和M2是從牛奶中分離出來的.B1,B2 ,G1 ,G2 ,M1 和 M2 在分子結構上十分接近。這次蒙牛事件的主角是M1。我們來看看各自的化學結構式。

 B1,B2,M1,M2右邊是一個五元環結構，B1的不飽和程度要略大于B2，M1和M2上的呋喃環多了一個羥基，而G1和G2是一個六元環結構。這里黃曲霉毒素分子中的雙呋喃環結構是產生毒性的重要結構。研究表明，黃曲霉毒素的細胞毒作用是干擾信息RNA和DNA的合成，進而干擾細胞蛋白質的合成導致動物全身性損害。另外黃曲霉毒素B1能與tRNA結合形成加成物，黃曲霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA與某些氨基酸結合的活性對蛋白質生物合成中的必需氨基酸，如賴氨酸亮氨酸,精氨酸和甘氨酸與tRNA的結合均有不同的抑制作用，從而在翻譯水平上干擾了蛋白質生物合成影響細胞代謝。

看來對黃曲霉毒素的檢測勢在必行。現在主流的檢測方法主要有兩種，即高效液相-質譜法（HPLC-MS）和ELISA快速檢測方法。下面我們摘取相關文獻進行討論。

1. 王巖松等用固相萃取-高效液相色譜/串聯質譜檢測谷物中黃曲霉毒素 B1 B2 G1 G2 和 M1（下載，提取碼XBpS8G8n）。并且優化了液相色譜條件和質譜的相關參數。如可能含黃曲霉素的谷物樣品經研磨成粉末后，直接經甲醇-水( V: V = 10: 90) 提取，Oasis HLB固相萃取凈化，乙腈-水( 0. 2%甲酸) 梯度洗脫，選擇電噴霧離子源( ESI) ，正離子掃描多反應監測(MRM) 模式，外標法定量。黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 和M1的定量下限分別為 0.1、0.1、0.2、0.3、0.2ng/g， 平均回收率在74.6% ～89.6% 之間， 測試精密度( RSD) 在5.2% ～ 11.3%之間。方法已用于谷物樣品檢測，黃曲霉毒素殘留量最高達到B1 5.86ng/g 、 G1 8.6ng/g、 M1 4.0ng/g， B2和G2未檢出。

2. 裴世春等將辣根過氧化物酶(HRP)與高純度抗黃曲霉毒素M1（AFM1）單克隆抗體進行偶聯后對其與AFM1競爭性反應條件進行優化（下載，提取碼Namm149p），并利用AFM1污染標準物質ERMI-BD282(0)、ERMI-BD 283(0.11μg/kg)、ERMI-BD 284(0.44μg/kg)等對檢測體系的靈敏度和精確性進行驗證。結果當AFM1-BSA包被質量濃度0.25μg/L、抗AFM1 mAb-HRP稀釋2000倍時dc-ELISA檢測AFM1的IC50為0.75μg/L，檢測范圍為0.015～4.05μg/L，添加AFM1至0.45μg/L的鮮奶樣品中檢測回收率平均為80%，dc-ELISA可滿足鮮乳中AFM1國家殘留限量標準0.5μg/kg的檢測要求。該體系可應用于鮮奶制品中 AFM1 大于0.5μg/kg污染樣品的快速初篩。