分子生物學常用試劑的配制

1．LB(Luria-Bertani)培養液、平板的配制
配制每升LB培養液，應在950ml去離子水中加入：
細菌培養用酵母提取物（bacto-yeastextract）5g
細菌培養用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g
NaCl10g
搖動容器直至溶質完全溶解，用5mol/LNaOH(約0.2ml)調節pH值至7.0，加入去離子水至總體積為1L，在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min。
L瓊脂平板的配制：
先按上述配方配制液體培養基，臨高壓滅菌前加入瓊脂糖15g/L，同法高壓蒸汽滅菌20min。從高壓滅菌器取出培養基時應輕輕旋動以使熔解的瓊脂糖能均勻分布于整個培養基溶液中，應使培養基降溫至50℃時，加入抗生素等不耐熱的物質。為避免產生氣泡，混勻培養基時應采取旋動的方式，然后可直接從燒瓶中傾出培養基鋪制平板。90mm直徑的培養皿約需30－50ml培養基，培養基完全凝結后，應倒置平皿并貯存于4℃備用。

2．瓊脂糖凝膠的配制
根據所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖，加入相應電泳緩沖液中，用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖完全溶解，加入適量E混勻，適當冷卻后傾入凝膠鑄槽中，插入梳子，凝膠厚度不超過梳孔，如有氣泡產生則用玻璃棒驅除，不能過早拔除梳子，應待凝膠完全凝結后才能拔除梳子。

3．P1、P2、P3的配制P1的配制：在800ml去離子水中溶入Tri堿6.06g，Na2EDTA?2H2O3.72g，用HCl調整H至8.0，用去離子水調整容積至1升，每升P1內加入RNaseA100mg。
P2的配制：在950ml去離子水中溶入aOH8.0g，20％SD50ml，調整容積至1升。
P3的配制：在500ml去離子水中溶入醋酸鉀294.5g，用冰醋酸調整H值至5.5，用去離子水調整容積至1升。

4．常用緩沖液：
TE
pH7.4
10mmol/LTris?Cl(pH7.4)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH7.6
10mmol/LTris?Cl(pH7.6)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH8.0
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STE(亦稱TEN)
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
5%TritoX-100
TNT
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
150mmol/LaCl
0.05%Twee20
電泳緩沖液
Tris-乙酸（TAE）：50×濃貯存液（每升）：242gTri堿

5 7.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用時再稀釋50倍。
Tris-磷酸（TPE）：10×濃貯存液（每升）：108gTri堿
15.5ml85％磷酸（1.679g/ml）
40ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用時再稀釋10倍。
Tris-硼酸（TBE）：5×濃貯存液（每升）：54gTri堿
27.5g硼酸20ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用時再稀釋10倍。

堿性緩沖液：1×使用液（每升）：5ml10mol/LaOH
2ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸：5×濃貯存液（每升）：15.1gTri堿
94g甘氨酸（電泳級）（pH8.3）
50ml10%SDS（電泳級）
2×SD凝膠加樣緩沖液
100mmol/LTris?HCl(pH6.8)
200mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）
4%SDS（電泳級）
0.2％溴酚藍
20％甘油

30％丙烯酰胺：
將29g丙烯酰胺和1gN,N’－亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中，加熱至37℃溶解之，補加
水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過濾除菌查證該溶液的pH值應不大于7.0，置棕色瓶中
保存于室溫。
10mol/L乙酸銨：
把770g乙酸銨溶解于800ml水中，加水定容至1L后過濾除菌。

1mol/LCaCl2：
在200ml純水中（Milli-Q水或相當級別的水）溶解54gCaCl2?6H2O，用0.22濾器過濾除菌，分裝成10ml小份貯存于－20℃。

2.5mol/LCaCl2：
在20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl2?6H2O，用0.22濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于－20℃。

1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：
用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于－20℃。
0.5mol/LEDTA(pH8.0)：
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na?H2O），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調節溶液的pH值至8.0，然后定容至1升，分裝后高壓滅菌備用。

溴化乙錠（10mg/ml）：
在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數小時以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中，保存于室溫。

1mol/LMgCl2：
在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O，用水定容至1升，分裝成小份并高壓滅菌備用。

酚：氯仿：
把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層，保存于4℃。

磷酸緩沖鹽溶液（）：
在800ml蒸餾水中溶解8gaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl調節溶液的pH值至7.4，加水定容至1升，高壓蒸汽滅菌20min。保存于室溫。

乙酸鉀溶液（用于堿裂解）：
在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。
3mol/L乙酸鈉(pH5.2和7.0)：
在800ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調節pH值至5.2或用稀乙酸調節pH至7.0，加水定容至1升，分裝后高壓滅菌。
1mol/LTris：
在800ml水中溶解121.1gTris堿，加入濃HCl調節pH至所需值。
pHHCl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
應使溶液冷至室溫后方可最后調定pH值，加水定容至1升，分裝后高壓滅菌。
Tri緩沖鹽溶液（T）：
在800ml蒸餾水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿，加入0.015酚紅并用HCl調pH值至7.4，用蒸餾水定容至1升，分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡，于室溫保存。

5mmol/LNH4Ac溶液：
秤取乙酸銨192.7g，加重蒸水250ml混勻，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2滅菌20min。
10mg/mlA（小牛血清白蛋白）溶液：
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4℃冰箱貯存備用。
10%十二烷基硫酸鈉（SDS）：
在900ml水中溶解100g電泳級SDS，加熱至68℃助溶，加入幾滴濃鹽酸調節溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分裝備用。