利用Trizol從植物組織中制備RNA實驗

植物組織

Trizol氯仿異丙醇乙醇DEPC處理過的水液態N2NaCl檸檬酸鈉

轉子-定子均化器研缽和杵圓錐形管

一、材料

1. 緩沖液、溶液和試劑

Trizol(Invitrogen)

氯仿

異丙醇

乙醇，70%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 處理過的水配制

DEPC 處理過的水、

液態 N_²

NaCl,1.2mol/L

檸檬酸鈉,0.8mol/L

2. 特殊設備

轉子-定子均化器（或相當的）

研缽和杵，在 DEPC 處理過的水中洗滌，液氮中預凍

50 ml 圓錐形管，例如 Falcon

3. 細胞和組織

合適的植物組織

二、方法

1. 液氮預凍過的研缽中研磨約 1g 植物組織，操作時使用足夠的液氮淹沒植物組織。

將組織研磨成很細的粉末，這點很重要。

2. 將粉末轉移到 50 ml 圓錐形管中，管中已按每克組織 10 ml 的量加入 Trizol。

3. 使用轉子-定子均化器均質化組織 30s。

4.4°C 下 1500 g 離心裂解產物 15 min 以移去殘渣。

5. 將上清液轉移到一新管中。每毫升 Trizol 加 200ul 氯仿。

6. 將管顛倒數次以混合。室溫下溫育 5 min。

7.4°C 下 1500 g 離心 20 min。將上清液轉移到一新的 50 ml 管中。

8. 加 0.5 倍體積異丙酵和 0.5 倍體積的 0.8mol/L 檸檬酸鈉、1.2mol/L 氯化鈉溶

例如，對 500ul 體積的液相而言，應加 250ul 異丙醇和 250ul 檸檬酸鈉溶液。

9 混合，室溫下溫育 1min。于-20°C 保存過夜可提高 RNA 產量。

10.4°C 下 1500 g 離心 20 min。

11. 移棄上清液，每毫升 Trizol加 lml70% 乙醇，以進行初步抽提。

12.1500 g 離心 15 min。小心移棄上清液，避免擾動沉降物。將沉降物風干。

13. 將 RNA 溶解于 DEPC 處理過的水中。

lg 成熟葉組織的 RNA 產量可達 500ug。

這個方案對含多酚化合物或樹脂的植物組織可能不適用。對富含多酚、樹脂或淀粉的提取困難的植物組織，推薦使用 ConcertPlantReagent(Invitrogen)。