動物細胞培養主要儀器

一、潔凈間擺放的儀器

（一）提供細胞培養環境的儀器

l.CO2培養箱

指能精密控制并提供恒溫、恒濕、潔凈、恒定CO2濃度的儀器，利用該儀器可使用培養皿、多孔板（(6-96孔板）、培養方瓶等進行細胞培養。

根據容積大小，有60-190L臺式，也有上下堆疊落地式。

根據通氣狀況，一般通CO2和空氣，也有3氣（CO2、N2和空氣）或4氣（CO2、NZ2、O2和空氣）培養箱。

根據控溫類型，區分為水套式和氣套式兩種。

2．細胞工廠

在CO2培養箱中，應用特定的培養容器進行細胞大量培養。

3．滾瓶培養

(1)滾瓶培養箱放置于CO2培養箱中使用，有驅動滾瓶滾動的機械裝置，可以應用滾瓶進行細胞大量培養。

(2)滾瓶培養架在CO2濃度、溫度、濕度可控的潔凈間內使用，有驅動滾瓶滾動的機械裝置，可以應用滾瓶進行細胞大量培養。

4．生物反應器

生物反應器，也稱動物細胞罐，應具有良好的無菌控制，通過專門的控制器組件進行細胞大量培養，一般需要4氣（CO2、N2、O2和空氣）培養，可分批次培養和連續培養形式。

需要配置專門的補料瓶。培養工藝復雜，儀器設備的造價往往很高，通常用于研究、中試和生產。

根據罐體容量和培養容量（培養容量往往比罐體容量小）區別大小。一般在研究實驗室使用的生物反應器的罐體體積常在30L以下，用于生物制品制備的生物反應器體積達到500L以上。罐體可以是鋼化玻璃、陶瓷，也可以是不銹鋼或欽合金或鐵。

（二）用于換液操作的儀器

1．微量移液器

微量移液器是常用的無菌操作移液用儀器，有單通道、8通道和12通道等規格。常見的種類如下：

(1)50-200μl單道微量移液器，配套200μl無菌塑料吸嘴使用。

(2)50-300μl8道微量移液器，配套300μ1無菌塑料吸嘴使用。

(3)500-5000μ1微量移液器，配套5000μ1無菌塑料吸嘴使用。

(4)電動大量移液器，配合無菌長絲滴管、無菌刻度移液管使用，移液速度可調。

（三）鏡檢與顯微影像記錄儀器

1．倒置顯微鏡和倒置熒光顯微鏡

與正置顯微鏡（普通顯微鏡）的主要區別在于，倒置顯微鏡是載物臺在光源下方，或者說物鏡在載物臺下方的顯微鏡，使得物鏡鏡頭與培養物液層下方的距離最短。

倒置熒光顯微鏡是帶有紫外光源（熒光激發光源）的倒置顯微鏡。

倒置顯微鏡和倒置熒光顯微鏡都分別比同品質的正置顯微鏡（普通顯微鏡）和正置熒光顯微鏡（普通熒光顯微鏡造價高出10倍以上。倒置顯微鏡和倒置熒光顯微鏡往往屬于三目顯微鏡（指除了裝配有2個普通目鏡外，尚有接駁顯微攝影的目鏡）。

2．顯微攝影系統

指通過接圈與顯微鏡三目接頭相連，借助配套的專業PC軟件獲得顯微影像并能進行處理的裝置。

3．細胞計數器材

細胞計數常用的是血細胞計數板或細胞計數儀。

細胞計數儀價格昂貴，如invitrogen的Countess自動細胞計數儀。

一般地，血細胞計數板并不屬于儀器，單價數十至數百元。但是，血細胞計數板有計量許可，計數窗有玻璃刻畫線，與配套的蓋玻片一起使用。有2個計數窗，每個計數窗使用有4-5個計數大格。細胞密度／ml＝計數窗內大格的平均細胞數×104/ml。

（四）無菌操作依賴的儀器

無菌操作的區域主要是在潔凈間內的超凈工作臺內完成的。

1．空氣凈化器

使潔凈間內空氣按要求進行除塵、紫外消毒滅菌、循環。

2．潔凈間換氣裝置

使潔凈間外新鮮空氣經過初效和高效濾器濾過除塵后進人室內，并且把室內含粉塵的不新鮮的空氣按要求排放到室外的裝置，一般設置有定時開關，使每小時換氣達到一定的次數，保證潔凈間內空氣潔凈度維持在某個級別以上。

3．超凈工作臺

超凈工作臺，也稱超凈工作臺或無菌工作臺。根據通過高效濾器送出風的方向區分為垂直風淋和水平風淋兩種，風速可調，內置照明燈管和紫外燈管。垂直風淋超凈工作臺常見的有單人雙面、雙人雙面、單人單面、雙人單面等規格。

(1)超凈工作臺使用步驟

①用前準備：先用消毒抹布擦拭臺面干凈，整理臺面器材到臺面兩側，關閉兩側玻璃門，開啟電源開關，打開風淋，單獨打開紫外燈照射30-40min再關閉；

②使用時：操作者雙手（或戴手套）消毒，打開照明燈，抬升玻璃門至合理高度，可點燃酒精燈以便輔助滅菌或消毒使用。由外部拿人的無菌操作物品需注意除塵處理（先在超凈工作臺外部拆解無菌物品的外包裝、用消毒酒精棉球擦拭存塵外表面等）；

③使用后：及時清理廢棄物和濺落物，移走用過的器材，擺放好臺面物品，并用消毒抹布或消毒酒精棉球擦拭臺面使干凈，關閉照明燈和側玻璃門，打開紫外燈照射30-40min再關閉，然后關閉風淋和總電源開關。

(2)超凈工作臺使用注意事項

如果超凈工作臺電源、照明燈、紫外燈、風淋等出現異常，需經過調節使正常后方可使用。

操作者雙手在潔凈臺內部分的穿著（穿戴潔凈服、乳膠手套，或無穿戴）必須符合無菌操作要求。

每次使用后用消毒液浸泡的濕抹布擦抹臺面粉塵，長時間不使用超凈工作臺也應定期用消毒液浸泡的濕抹布擦抹臺面粉塵。

定期擦抹照明燈管和紫外燈管上可能存在的微塵，以便保證充足的照明效果和充分的消毒滅菌效果。

二、試劑、培養用液及細胞材料處置用儀器

所涉及的一般試劑通常存放于輔助間柜子或潔凈間柜子。需要冷藏或凍存的生化試劑、血清、培養基、細胞材料等，需要區別對待，存放到對應的儀器內，以保證其活性和功能。

（一）用于生化試劑、培養用液存放的儀器

1．普通冰箱

存放培養用液的普通冰箱，通常放于潔凈間。

普通冰箱一般分為冷藏區和冷凍區，冷藏區的溫度一般調節到4℃左右，冷凍區的溫度一般最低能調節到-26℃。不能凍存的試劑和材料必須放冷藏區，可以凍存的試劑和材料最好放在冷凍區。

2．冰拒

冰柜分冷藏冰柜和冷凍冰柜。可大量存放生物試劑和材料。

3．低溫冰箱

只有冷凍區，一般指低溫能控制到-50℃，高溫不超過0℃的冷凍用冰箱。用于長期存放蛋白類材料或試劑。

（二）細胞材料凍存用儀器

1．超低溫冰箱

一般指低溫能達到-50℃以下，如-70℃，或者-86℃的冷凍用冰箱。主要用于細胞株、細胞系或其他細胞材料如組織、胚胎等的短期保存。

2．液氮罐

液氮層內的溫度為-196℃，有足夠液氮的液氮罐內氣體部分的溫度可到-100℃以下。通常用于保存細胞株、細胞系或其他細胞材料如組織、胚胎等。

液氮會自動升華，因此，根據實際消耗狀況，需及時地定期、定量地補充液氮。一般認為液氮內的細胞株、細胞系或其他細胞材料如組織、胚胎等可以實現永久保存。

（三）培養用液升溫用儀器

一般需要準備一臺恒溫水浴，用于培養用液從零上低溫到37℃的升溫。恒溫水浴使用時需加注純水以免產生水垢影響無菌操作。