化學發光與ELISA法檢測乙肝病毒血清學標志物方法學比較

　　病毒性肝炎中乙型肝炎的危害較大，我國又為乙肝的高發區，約占世界HBV感染者的一半。乙肝病毒的病原體不僅具有傳染性，還可能導致發展成肝硬化，甚至肝癌，所以HBV標記物的早期、準確、定量檢測對乙肝臨床診斷、療效觀察及預防具有重要意義。目前國內檢測HBV-M使用較多的仍是占主導地位的ELISA法。隨著化學發光技術的發展，其在免疫學檢驗方面的應用日益受到人們的重視。化學發光法檢測乙肝病毒血清標志物具有高靈敏度、寬線性、反應快，影響因素少，結果準確等優點。因此，化學發光法更適用于需要進行定量、半定量檢測的臨床患者標本，顯示出很好的應用前景。 
　　化學發光法檢測肝炎標志物與ELISA法有何差異尚無明確的結論。本研究分別用化學發光和ELISA法檢測乙型肝炎的血清學標志物，比較分析兩種方法測試結果的一致性和差異性，為乙型肝炎的篩查、臨床診斷、指導用藥及其判斷預后等不同目的的檢測選擇一種更為快速、準確且節約的方法。 
　　1資料與方法 
　　1.1一般資料 選擇2013年10月～2014年3月就診的HBV感染者96例，其中男52例，女44例；年齡23歲～76歲，平均47歲。其中單獨HBsAg陽性5例，單獨抗-HBe陽性11例，單獨抗-HBs>1000IU/L的5例，單獨抗-HBs>10IU/L但<1000IU/L6例，單獨HBeAg陽性且DNA擴增<500拷貝4例。 
　　1.2儀器與試劑 
　　1.2.1儀器美國雅培全自動酶免分析儀ARCHITECT-i2000。 
　　1.2.2試劑上海科華生物技術有限公司肝炎標志物ELISA試劑盒；ARCHITECT-i2000 SR乙肝標志物配套試劑。 
　　1.3乙肝病毒血清標志物的檢測 
　　1.3.1 ELISA法所用試劑由上海科華生物技術有限公司提供，于有效期內使用，操作和結果判斷嚴格按試劑要求進行，并記錄結果。 
　　1.3.2化學發光法將所收集到的血清用美國雅培全自動酶免分析儀ARCHITECT-i2000進行檢測，乙肝六項標志物的定值質控血清購自雅培公司，操作和結果判斷嚴格按試劑要求進行并記錄結果。 
　　1.4統計學分析用SPSS16.0統計分析軟件對化學發光法與ELISA法的檢測結果進行χ2檢驗，以P<0.05為有統計學差異。 
　　2結果 
　　2.1乙肝結果比較乙肝兩種方法測定HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBcIgM結果符合率分別為92.31%、92.31%、95.38%、81.54%、92.31%。經配對χ2檢驗HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBcIgM兩種檢測方法結果差異無統計學意義（P>0.05）。抗-HBe兩種檢測方法結果差異有統計學差異（P<0.05）。（見表1）。 
　　注：*表示兩組間比較有統計學差異，P<0.05。 
　　3討論 
　　常規的乙型肝炎病毒免疫標志物的血清學檢查為五項即：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc，是臨床診斷、治療、分析和判斷HBV感染者病程及傳染性的重要依據。HBV標記物的早期、準確、定量檢測對乙肝臨床診斷、療效觀察及預防具有重要的意義。HBV-M的變化是評估乙型肝炎感染后病情轉歸的重要依據，也是抗病毒治療的療效監測指標之一。 
　　目前國內檢測HBV-M使用較多的仍是占主導地位的ELISA法。ELISA法的優點在于它操作簡單、適合于大批量標本的測定，并且成本低廉，其靈敏度也較好。但在臨床檢測中的ELISA法存在以下幾個方面的缺點：①操作過程中各個微孔反應板的間隔小，容易污染，易產生假陽性結果；②無法定量，靈敏度相對較低；③由檢測原理帶來的前帶現象無法解決；④無法完成HBV感染的動態觀察以及低水平HBV感染指標檢測，只能滿足臨床對單純陽、陰性結果的判斷。隨著化學發光技術的發展，其在免疫學檢驗方面的應用日益受到人們的重視。化學發光免疫測定方法，簡稱CIA，是以吖啶酯（AE）及其衍生物標記單抗，AE分子中的活化基因與抗原或抗體末端氨基共價結合后，生成的標記物化學發光活性強、穩定性好。化學發光法檢測乙肝病毒血清標志物具有高靈敏度、寬線性、反應快，影響因素少，結果準確等優點。 　　譚璐等[2]比較了化學發光法和ELISA法，結果發現兩者靈敏度基本相似，對HBsAg，抗-HBs，HBeAg及抗-HBe的檢測相互符合率均在95%以上，但化學發光法檢測血清乙肝標志物的自動化程度比ELISA法高，并能定量檢測HBsAg和抗-HBs，可動態觀察療效和監測病情。彭仕芳[3]等對1140例乙型肝炎患者血清HBV標志物用化學發光法和ELISA兩種方法檢測HBsAg、HBeAg、抗-HBc和抗-HBe四項指標，結果顯示化學發光法檢測各指標的陽性率均高于ELISA法，化學發光法對血清HBV標志物的檢出陽性率高于ELISA法，特別是對HBeAg和抗-HBe指標的檢測。 
　　本文兩種方法測定肝炎標志物，只有抗-HBe在兩種檢測方法中有差異（P<0.05）。ELISA法和化學發光法檢測乙肝的一致性較好，化學發光法靈敏度高于ELISA法，與國內研究結果相一致[1，2]。ELISA法在檢測HBV血清標志物五項指標，特別是抗-HBe，抗-HBc濃度稍高于正常時，易出現漏檢，而化學發光法法可彌補這點不足。化學發光法不僅能對HBsAg和抗-HBs進行定量測定，而且靈敏度和特異性更高，可減少低濃度HBsAg、HBeAg感染患者的漏診[4]。這不僅是方法學上的進步，更重要的在于其能評估HBV感染后病情轉歸及抗病毒治療療效等，具有重要的臨床意義。化學發光法由于使用全自動儀器及配套試劑，使人為因素減至最低，提高了方法的穩定性和結果的重復性，使批內差異與批間差異都較小。而ELISA法由于受孵育時間、洗板等因素的影響，容易導致非特異性反應的發生，造成結果的誤差。在HBsAg、抗-HBs的檢測中，化學發光法為定量結果，其能夠對機體是否真正具有抵抗乙肝病毒的免疫力做出正確的評價，避免誤導。本文還發現，抗-HBs定量在10mIU/L～100mIU/L之間的標本，ELISA結果為陽性，但此時抗體對HBV并無中和作用，仍有感染HBV的危險。只有"定量"在100mIU/L以上時才具有抵抗HBV入侵的作用[5]，因此對乙肝疫苗免疫力的評價和高危人群預防免疫具有重要意義。ELISA法的操作簡單、適合于大批量標本的測定，且成本低廉，靈敏度也很好，故不能完全淘汰。所以，ELISA方法檢測為陽性的標本，應以適宜的方法復查，以減少誤報。 
　　綜上，兩種方法各有其特點且都能滿足臨床需要，從方法學角度和自動化程度看，化學發光法技術優于ELISA法，但由于儀器、試劑較昂貴，不同目的檢測應選用不同的方法：ELISA法可用于健康體檢，術前肝炎病毒篩查等；化學發光法可用于肝炎患者的疾病監測、指導用藥、療效觀察及判斷預后等方面。