化學發光免疫技術與時間分辨技術的異同點

概念

化學發光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術。是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時間分辨熒光免疫分析之后發展起來的一項最新免疫測定技術。

時間分辨熒光免疫測定（TRFIA）是以鑭系元素標記抗原或抗體，并與時間分辨測定技術結合而建立起來的一種新型非放射性微量免疫分析技術，它根據鑭系元素螯合物的發光特點，用時間分辨技術測量熒光，同時檢測波長和時間兩個參數進行信號分辨，可有效地排除非特異熒光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。

原理

化學發光免疫分析包含兩個部分, 即免疫反應系統和化學發光分析系統。化學發光分析系統是利用化學發光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化, 形成一個激發態的中間體, 當這種激發態中間體回到穩定的基態時, 同時發射出光子(hM) , 利用發光信號測量儀器測量光量子產額。免疫反應系統是將發光物質(在反應劑激發下生成激發態中間體) 直接標記在抗原(化學發光免疫分析) 或抗體(免疫化學發光分析) 上, 或酶作用于發光底物。魯米諾(1umino1)、異魯米諾(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim ester)衍生物、辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四類標記物。

時間分辨熒光免疫測定（TRFIA）基本原理

用三價稀土離子及其鰲合劑作為示蹤物，代替熒光物質、同位素或酶，標

記蛋白質、激素、抗原、抗體、核酸探針等物質，當免疫反應體系發生后，根據稀土離子螯合物的熒光光譜的特點，用時間分辨熒光分析儀測定免疫反應最后產物中熒光強度。根據熒光強度或相對熒光強度比值，來判斷反應體系中分析物的濃度，達到定量分析之目的。

應用

化學發光免疫分析技術（CLIA）

各種激素、病毒抗原抗體、腫瘤標志物、感染性疾病、心臟標志物、治療藥物檢測等各種抗原、抗體和半抗原

時間分辨熒光免疫測定（TRFIA）應用廣泛

1. 多肽類：蛋白質、激素（甲狀腺激素、甾體類激素）。

2.病原體抗原/抗體

3.病毒性肝炎標志物

4.腫瘤相關抗原

5.藥物

6.核酸

優缺點

優點

化學發光免疫分析法（CLIA）

?  單個樣本檢測速度快，適合做急診；

?  靈敏度較高；

?  自動化程度高；

時間分辨熒光免疫技術（TRFIA）

?  發射光和激發光有較大的STOKES位移——高特異性

?   長壽命熒光，降低其他物質的熒光干擾——高靈敏度 ?

?  半衰期長達幾十萬年，試劑受干擾小——高穩定性 

?  熒光壽命長，易于自動化

?  重復性好

?  標準曲線范圍寬

?  結果可靠

與其它技術的相對優勢： 

（1）、是現有的免疫檢測方法中靈敏度最高的 

（2）、是現有的免疫檢測方法中穩定性最好的 

（3）、多標記檢測是目前所有免疫檢測技術中獨一無二的

缺點

化學發光免疫分析法（CLIA）

?  發光過程短

?  本底較高

?  儀器故障率較高

?  試劑穩定性差

?  檢測精度不高

試劑價格高

時間分辨熒光免疫測定（TRFIA）

?  測量方式復雜

?  儀器成本及維護費用高

?  環境及樣品中同元素可導致本底干擾等

化學發光與時間分辨熒光方法學比較

化學發光免疫技術原理圖

時間分辨免疫技術原理圖

鑭系元素的熒光光譜stokes位移示意圖