單克隆抗體的純化實驗

實驗材料 蛋白質

試劑、試劑盒 Tris腹水液寧酸鹽緩沖液甘氨酸乙酸鹽緩沖液

儀器、耗材 超濾器濾膜

實驗步驟

1.  將蛋白A-Sepharose置于Tris緩沖液中（超過50倍的量，v/v）充分溶脹。在室溫下將其灌入直徑為2.5 cm 玻璃層析柱中，用Tris緩沖液使其平衡。

2.  腹水濃稀釋于3倍體積的Tris緩沖液，以1~5 ml/min 的速度上樣于蛋白A-Sepharose柱，用Tris緩沖液洗柱子直至所有的未結合的蛋白都被洗脫，采用A280監測。

3.  依次用2~3倍柱床體積的檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液液以及甘氨酸·Cl緩沖液連續洗脫結合蛋白，洗脫下的蛋白直接接入裝有中和緩沖液的管中，中和緩沖液的體積應為所收集蛋白體積的1/4。

4.  采用ELISA法檢測抗原特異性MAb。

5.  在超濾器中濃縮所分離的單克隆抗體到1~5  mg/ml，所用超濾膜為XM50，將單克隆抗體存于-20℃。