免疫熒光標記是微生物學、免疫學、病理學及免疫組織化學中常用的一種免疫學實驗方法，在臨床上得到了廣泛的應用。
| 實驗方法原理 | 免疫熒光標記技術（immunofluorescence technique）是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素，當與其相對應的抗原或抗體起反應時，在形成的復合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見發出熒光的抗原抗體結合部位，檢測出抗原或抗體。 |
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| 實驗材料 | 單層細胞 |
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| 試劑、試劑盒 | PBS多聚甲醛甲醇抗體 |
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| 儀器、耗材 | 離心機水浴鍋培養箱 |
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| 實驗步驟 | 1. 置生長成片的單層細胞于冰上冷卻，吸去培養液并以4℃PBS洗滌。吸去PBS。
2. 如欲研究細胞表面抗原，則以2%PFA于冰上面定30 min。如為細胞質抗原，則可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min，或以100%甲醇在普通冰箱的結凍室（-10~-20℃）固定15 min。 3. 吸去固定液，用4℃PBS洗2次（毎次5 min）。稀釋的笫一抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min。 4. 加第一抗體于培養皿中，使其恰好覆蓋細胞，4℃溫育1 h，然后用4℃PBS洗4次（每次5 min）。 5. 稀釋的笫二抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min。 6. 加第二抗體于細胞上，4℃溫育4 h。然后用4℃PBS洗4次。 7. 若不想立即觀察細胞，則將細胞于PBS中存放。蓋好培養皿，以鋁箔包裹，冷藏，在24 h 內觀察此實驗結果是很重要的，因熒光會迅速減弱或與細胞解離。 展開 |
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| 注意事項 | 1、熒光染色后一般在1h內完成觀察，或于4℃保存4h，時間過長，可能會使熒光提前衰退。
2、每次試驗均需設置以下三種對照：
(1) 陽性對照：陽性血清+熒光標記物;
(2) 陰性對照：陰性血清+熒光標記物;
(3) 熒光標記物對照：PBS+熒光標記物。 展開 |
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