原位雜交組織化學常用試劑及處理2

九、原位雜交信號顯示

　　目前應用原位雜交方法中，信號的顯示主要有放射自顯影，酶底物及免疫金銀等方法，在此歸納有關的主要試劑。

　　1．A-B顯影液

　　稱取上述試劑，按配方分別溶于50ml ddH₂O中，于顯影前，在室溫將兩者（A液及B液）按1：1混合，稍加搖動促進混合，即可將貼有切片標本的切片放入顯影液，于室溫避光（可暗室）反應5～15min。顯影時間和溫度相關，需自己根據情況摸索。終止反應只需將顯影液倒出，自來水沖洗即可。倒出的AB顯影液可暫時不扔，光鏡下觀察，若明顯顯影不夠，還可重新或繼續顯影。AB顯影液要求臨用前配制，在顯影時才將AB二液混合。否則，A液過久會產生黃色沉淀，增加背景。

　　AB液用于免疫金銀法中，使金標記顆粒信號放大，形成棕黑色沉淀。

　　2．DAB-H₂O顯色液

　　配制方法見附錄一。

　　該液用于標本被標記上辣根過氧化物酶（HRP）的方法。產物為棕黃色。

　　3．NBT-BCIP顯色液

　　配制方法，詳見附錄一。

　　該液用于有堿性磷酸酶標記物的方法中。產物為紫藍色。

　　4．Kodak D-19顯影液

　　配制：先將500ml水中加溫50℃，按上述配方順序加藥，同時充分攪拌，每加一種藥完全溶解后，再加另一種藥品，否則，所配的顯影液易產生混濁而效果差，最后補足水至1000ml充分混合，室溫或4℃避光保存。最好包上紙。

　　該液用于放射自顯影時的顯影。

　　5．Kodak F-5定影液（酸性堅膜定影液）

　　※：28%醋酸為3份冰醋酸和8份水混合液。

　　配制：同Kodak D-19顯影液。