原位雜交組織化學常用試劑及處理2
九、原位雜交信號顯示 目前應用原位雜交方法中，信號的顯示主要有放射自顯影，酶底物及免疫金銀等方法，在此歸納有關的主要試劑。 1．A-B顯影液 稱取上述試劑，按配方分別溶于50ml ddH2O中，于顯影前，在室溫將兩者（A液及B液）按1：1混合，稍加搖動促進混合，即可將貼有切片標本的切片放入顯影液，于室溫避光（可暗室）反應5～15min。顯影時間和溫度相關，需自己根據情況摸索。終止反應只需將顯影液倒出，自來水沖洗即可。倒出的AB顯影液可暫時不扔，光鏡下觀察，若明顯顯影不夠，還可重新或繼續顯影。AB顯影液要求臨用前配制，在顯影時才將AB二液混合。否則，A液過久會產生黃色沉淀，增加背景。 AB液用于免疫金銀法中，使金標記顆粒信號放大，形成棕黑色沉淀。 2．DAB-H2O顯色液 配制方法見附錄一。 該液用于標本被標記上辣根過氧化物酶（HRP）的方法。產物為棕黃色。 3．NBT-BCIP顯色液 配制方法，詳見附錄一。 ......閱讀全文
原位雜交組織化學常用試劑及處理2
九、原位雜交信號顯示 目前應用原位雜交方法中，信號的顯示主要有放射自顯影，酶底物及免疫金銀等方法，在此歸納有關的主要試劑。 1．A-B顯影液 稱取上述試劑，按配方分別溶于50ml ddH2O中，于顯影前，在室溫將兩者（A液及B液）按1：1混合，稍加搖動促進混合，即可將貼有切片標本的切片放入顯影
原位雜交組織化學常用試劑及處理
一、雜交前準備 （一）DEPC水是經DEPC處理過的滅菌蒸餾水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可滅活各種蛋白質，是RNA酶的強抑制劑。原位雜交在雜交及其以前的各步處理中，所有液體試劑都應經DEPC處理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待處理水（蒸餾
原位雜交組織化學實驗技術2
DNA合成儀的誕生使制造寡核苷酸探針成為可能，與上述探針不同的是寡核苷酸探針不是克隆性DNA探針，它是由DNA合成儀依照所需雜交的靶核苷酸序列合成的。具有制造方便，價格低廉的優點，也可進行放射性與非放射性標記，但其特異性不如克隆性探針強，亦不如其雜交信號高。 原位雜交組織化學技術在近20年的發展
原位雜交組織化學雜交前處理
雜交前處理的目的在于提高組織通透性。增加靶核酸的可及性以及防止RNA或DNA探針與組織細胞或載玻片之間的非特異性結合，從而增強雜交信號，降低背景。雜交前處理的具體方法和步驟因所采用的固定劑、組織標本以及探針不同而異。用溫和的非交聯固定劑固定的細胞培養標本和冰凍切片，不需經特殊的雜交前處理，一般均能獲
常用試劑配制－2
Acetone / Formaldehyde FixativeAcrylamide Gel, denaturingAcrylamide Gel, nondenaturingAlkaline Phosphatase Buffer 1 (Glycine Buffer, 0.1 M, pH 10.4)Al
常用免疫組織化學染色方法－2
五)免疫組化雙染色法。(ⅰ) (Ionmuno- Histochemistry double staimimg method)?1.切片脫蠟至水。2.0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。3.水洗。4.抗原修復。5.PBS洗3次，每次1分鐘。6.加入非免疫性動物血清，孵育 10分鐘。7.PBS洗3次
原位雜交組織化學實驗要求及步驟
一、基本要求1. 組織取材：組織取材應盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養細胞最好在30 min 內固定。2. 固定目的是：（1）保持細胞結構；（2）最大限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；（3）使探針易于進入細胞或組織。最常用的固定劑是多聚甲醛，與其它醛類固定劑（如戊二醛）不同
原位雜交組織化學概述
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
核酸探針標記及原位雜交2
（二）隨機引物合成法 隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合，在Klenow酶的作用下，合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常，產物平均長度為400～600個，可以獲得大量的有效探針。反應時對模板的要求不嚴格，用微量制備的質
原位雜交組織化學雜交體檢測
? ?雜交體檢測又稱雜交體顯示，是指通過一定方法使雜交反應形成的雜交體（雜交信號）成為在顯微鏡下可識別的產物。對原位雜交反應信號進行顯示的方法因探針標記物不同而異。?? ?（一）放射性核素標記探針的檢測??? *個原位雜交實驗（1969年）以’H作為核酸探針的標記物，雜交信號用放射自顯影術檢測。隨著
cRNA探針在原位雜交組織化學
Angerer及其同事們首先應用RNA探針于原位雜交（見Cox et al 1984），核酸探針為單鏈的RNA分子，產生自具有質粒逆轉錄系統的cDNA克隆（圖20-2）。由于它是單鏈的，不像雙鏈的DNA探針，在溶液中不會再退火（reanneal），因此，較大百分比的探針可參與雜交反應，較cDNA探針
原位雜交組織化學實驗技術6
二、快速原位雜交細胞化學技術 原位雜交免疫細胞化學技術存在的難點之一是實驗手續繁瑣，實驗周期長。國外Liesi等（1986）和國內學者何彬等應用光敏生物素-鏈親合素（Biotin-streptavidin）膠體金系統進行原位雜交，得到了快速滿意的結果，全部實驗可在數小時內完成。 作用把含某種多肽
原位雜交組織化學實驗技術5
（8）熒光顯示： ①生物素標記DNA探針的熒光顯示。 1）應用PBS含5%無脂干奶（5μl每張蓋片），也可用1%牛血清白蛋白（BSA）-PBS覆蓋孵育5min室溫，以封閉非特異性結合部位。 2）移除多余液體，加抗生素-FITC（5μg/ml在PBS含5%奶粉或1%BSA，5μl/cm2）。在濕
原位雜交組織化學實驗技術4
二、生物素標記cRNA探針在原位雜交組織化學中的應用 （一）光敏生物素標記cRNA探針的應用 以線性質粒DNA為模板合成未加標記物的cRNA探針，使其最終濃度為0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再與等體積的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦鹵素燈下，距離光源20c
原位雜交組織化學實驗技術1
第一節 原位雜交組織化學概述 一、核酸分子雜交技術 1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質
原位雜交組織化學實驗技術3
（四）雜交后處理（post hybridisation treatment） 雜交后處理包括系列不同濃度，不同溫度的鹽溶液的漂洗。在原位雜交組織化學的實驗程序中，這也是一個重要的環節 。特別因為大多數的原位雜交實驗是在低嚴格度條件下進行的，非特異性的探針片段粘附在組織切片上，從而增強了背景染色。R
免疫細胞化學常用試劑介紹2
三、顯色液 免疫細胞化學中，由于抗原-抗體反應所形成的復合物本身無色，無法直接觀察，因而需借助于某些化學基團的呈色作用，使其得以顯示，以利于在顯微鏡下觀察。常用的顯色液有： 1．DAB（Diaminobenzidine）顯色液 DAB即3，3-二氨基苯聯胺 試劑：DAB（常用四鹽酸鹽） 50
DNA及寡核苷酸探針在原位雜交組織化學
一、DNA探針的應用 雖然一般認為DNA探針敏感度不如cRNA探針，但在病毒的檢測等領域中DNA探針仍得到廣泛的應用。 在原位雜交細胞化學的操作步驟方面與cRNA探針基本相同，所不同的是：（1）雜交時需先在高溫80～95℃短時處理，使DNA探針及細胞內靶DNA變性，解離成單鏈，迅置于冰上冷卻。然
原位雜交組織化學技術的基本方法
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
原位雜交組織化學技術的基本方法
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
原位雜交組織化學技術的基本方法（二）
如前所述，雜交前的準備只是為雜交的成功奠定基礎，要獲得滿意的實驗結果，在雜交這一實驗過程中還須注意以下的環節。1．探針的濃度 很難事先確定每一種實驗探針的濃度，但要掌握一個原則，即探針濃度必須給予該實驗zui大的信/噪比值。背景染色的高低也與探針濃度有關。根據國內外實驗工作者的經驗，認為zui佳原
常用試劑
一 細菌培養試劑 - 返回 -?LB培養基?? ?NaCl 10 g?? ?Yeast extract 5 g? ?Peptone 10 g? ?Add dH2O to ? ?1000 ml? ?Aliquot to 500ml f
DNA實驗技術：原位雜交實驗要求及步驟2
三、操作步驟（一）取材、冰凍切片：將動物以3%戊巴比妥鈉麻醉，打開胸腔，暴露心臟，刺破右心耳，將針尖刺入左心室用生理鹽水灌注（灌注量約為動物體重的2倍），再注入等量的4%多聚甲醛。（見圖2-7）。取材，置于4%多聚甲醛中后固定4hr。以0.1M PBS浸泡沖洗4-5次（換液：1次/hr）。將組織塊入
免疫組織化學常用染色方法
根據標記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標法，親和組織化學法，后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗體）在細胞或亞細胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用。
常用的免疫組織化學方法
一. 直接法: 是zui早出現的方法,是將酶直接標記在特異性抗體上,與標本中的抗原結合,讓酶催化底物反應產生有色物質,可以在光鏡下檢測. 直接法放大作用小,不夠敏感, 且標記一種抗體只能檢測一種抗原,所以應用就受到了限制.二 . 間接法是將酶標記在第二抗體上,形成抗原/一抗 /二抗-酶復合物,zui
分子生物學實驗室常用有毒試劑及應急處理
本文整合了分子生物學實驗室常用有毒試劑及應急處理的方法及注意事項。中毒常見的癥狀包括：呼吸系統、循環系統、消化系統、泌尿系統、神經系統、血液系統。常見有毒試劑：溴化乙錠（C21H20N3Br，EB）【性質】：EB是分子生物學常用染料【毒性】：強誘變劑、中度毒性【注意】：通風櫥中配制，接觸時需戴手套，
分子生物學實驗室常用有毒試劑及應急處理
本文整合了分子生物學實驗室常用有毒試劑及應急處理的方法及注意事項。中毒常見的癥狀包括：呼吸系統、循環系統、消化系統、泌尿系統、神經系統、血液系統。 常見有毒試劑：溴化乙錠（C21H20N3Br，EB） 【性質】：EB是分子生物學常用染料 【毒性】：強誘變劑、中度毒性 【注
原位雜交組織化學與免疫細胞化學結合法
原位雜交組化（ISHH）與免疫組織化學（IHC）結合法是先后用ISHH和IHC在同一切片或兩個相鄰切片進行染色，這樣就可以同一細胞中顯示出某種mRNA和相應的蛋白、多肽或其它抗原，從而可更好地了解某一基因的轉錄和蛋白、多肽合成的動力學。ISHH與IHC結合法可以在相鄰切片上分別進行ISHH和IHC染
常用生化試劑
>>>常用生化試劑貨號品?????名規???格價 格(元)備??注B1005?Acridine Orange,1/2 ZnCI2??(吖啶橙)5g/10g190/320Sigma分裝B1006Acrylamide??(電泳級丙烯酰胺)100g/500g120/500Sigma分裝B1007?????
常用化學試劑分類及用途解析
? 1.HPLC級高純液相色譜溶劑 HPLC試劑具有以下優點： ? 低紫外吸收; ? 非揮發性物質、游離酸、游離堿和水份含量低; ? 可用于熒光檢測; 用途：用于液相色譜(LC)樣品制備、LC樣品分析、LC-MS分析。 2.農殘級試劑 農殘級試