培養基的制備與微生物接種技術（1）

培養基的制備
一、實驗目的
1、了解人工培養基的主要成分及一般制備原則。
2、掌握基礎培養基的制造方法和過程。
二、實驗原理
培養基是人工配制的適合微生物生長繁殖的營養基質。培養基要具備以下條件：①要有適宜的營養物質和水分；②具有適宜的PH值；③配制后應經滅菌呈無菌狀態。
培養基按物理狀態可分液體培養基、固體培養基、半固體培養基。常用瓊脂作凝固劑。
培養基制備的基本程序：配料、溶化、測定及矯正PH、過濾、分裝、滅菌、無菌檢驗
三、儀器設備
試管、刻度吸管、紗布、濾紙、三角瓶、培養皿、量筒、漏斗、棉塞、電爐、天平、包裝紙、棉線、ph試紙、玻棒。試劑：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、磷酸氫二鉀、瓊脂條、0.1mol/L和1mol/L氫氧化鈉、0.1mol/L和1mol/L的鹽酸溶液、蒸餾水等。
四、相關知識點
一、配制原則和種類
（一）培養基配制原則
1、培養基：培養基是提供食用菌等生物生長發育所需的營養與特定環境條件的基質，如蘑菇菌是有機營養型中的草腐生菌。制備培養基不僅要考慮它所需要的含碳化合物、含氮化合物、礦物鹽類、生長因子，還要考慮水與pH環境，同時還應考慮它們培養方式是固體培養還是液體培養。因此，可以把按菌類生長發育需要比例配制的滅菌營養基質，稱為培養基。換言之，培養基必須具備三個條件：含有菌株生長發育所需要的營養物質；具有菌類生長環境條件；經過滅菌，并保持無菌狀態。
2、培養基的選擇：在整菌種制備過程中，從母種到原種、栽培種，各個階段的目的要求有所不同，所選用的培養基的配比也應有所區別。一般母種初生菌絲較嫩弱，分解養分能力差，要求營養豐富、完全，氮源、維生素的比例應高。須選用易于被菌絲吸收利用的物質，如葡萄糖、蔗糖、馬鈴薯、蛋白胨、無機鹽類及生長素等為等而原種、栽培種所需數量較多，且菌絲分解能力強，可利用大量農作物秸稈、糞草、棉籽殼、麩皮、米糠等原料作為培養基。
（二）培養基的種類
1、根據營養物質的來源，可以把培養基分炎天然培養基、半合成培養基和合成培養基。
（1）天然培養基　天然培養基是指用化學成分還不清楚或化學成分不恒定天然有機物配制而成的培養基，如各種農副產品及其下腳料──小麥、大豆、玉米粉、麩皮、米糠、作物秸稈、木屑、棉籽殼、甘蔗渣等，以及動植物組織的浸出液──牛肉膏、肉湯、馬鈴薯汁、麥芽汁、豆芽汁等都可以用來配制天然培養基，這種培養基來源廣，成本低，營養豐富，適合于在生產上大規模培養菌類使用，但這些天然有機物質因產地、品種、生長期的不同，化學成分不能宣。每批成分也不穩定，不宜用來做精細的科學實驗。以分離馴化食用菌培養基
（2）半合成培養基　為了促進食用菌菌絲的生長發育，常在天然培養基中添加適量的無機鹽類，或在合成培養基中添加適量的某些天然有機物，就成為半合成培養基。這類培養基種類繁多，應用廣泛，也是生長菌種和實際栽培最常用的培養基。

（3）合成培養基　是指采用化學成分已知的有機物（碳水化合物、含氮化合物、有機酸類）或無機物配制而成的培養基。這類培養基組成和含量明確，價格較貴，一般用于在實驗室范圍內做有關營養、代謝、菌種鑒定等有關于食用菌的生理生化研究。
2、根據培養基制成后的物理狀態，可將培養基分為液體培養基、半固體培養基和固體培養基。
（1）液體培養基　根據食用菌所需的營養物質，掃一定比例配成營養液，叫液體培養基。液體培養基可進行營養源的篩選實驗，以及生理生化方面如酶活力等研究，應用液體培養基生產的菌種也可在生產中進行使用。
（2）固化培養基　將各種營養成份按比例配制成營養液后，加入適量固化劑，如瓊脂，即可配成固化培養基。利用這種斜面試管可保藏及擴大菌種，同時亦可制成各種平皿固化培養基分離菌種。
（3）固體培養基　利用各種富含纖維素和木質素的農林廢棄物如木屑、棉籽殼、秸稈、玉米蕊等作為主要原料，再加入適量的米糠或麩皮和無機鹽類制成固體培養基。該培養基可作為二、三、級菌種生產用的培養基，也可以用它制成發酵草粉保藏菌種用的培養基。
五、實驗步驟
（一）制備牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基
1、配方：牛肉膏3—5g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂20—30g、蒸餾水1000mL。PH值7.4—7.6。
2、步驟：
（1）稱量：根據用量按比例依次稱取各種成分，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水融化后到入燒杯，蛋白胨易吸濕，稱量時要迅速。
（2）溶解：在燒杯中加入少于所需的水量，加熱，逐一加入各成分，使其溶解，瓊脂在溶液煮沸后加入，融化過程需不斷攪拌。加熱時應注意火力，勿使培養基燒焦或溢出。溶好后，補足所需水分。
（3）調pH值：若PH值不適宜，可用1mol/L NaOH或1mol/LHCl把pH值調至所需范圍。
（4）過濾：趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利于某些實驗結果的觀察，如無特殊要求時可省去此步驟。
（5）分裝：按照實驗要求，可將配制的培養基分裝入試管內或三角瓶內，分裝時注意，勿使培養基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。
?液體分裝：分裝高度以試管高度的1/4左右為宜，分裝三角瓶的量則根據需要而定，一般以不超過三角瓶容積的1/2為宜。

?固體分裝：分裝試管時其裝入量不超過試管高度的1/5，滅菌后制成斜面，斜面長度不超過管長的1/2。分裝三角瓶，以不超過容積的1/2為宜。
?半固體分裝：裝入量以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。
（6）加棉塞：分裝完畢后，在試管口或三角瓶口塞上棉花，以阻止外界微生物進入培養基而造成污染，并保證有良好的通氣性能。
（7）包扎：棉塞上包一層牛皮紙，扎緊，即可進行滅菌。
（8）滅菌：將上述培養基以0.1Mpa，121℃，高壓蒸汽滅菌20min。