基因組文庫法
一）基因組DNA分離、純化和加工
[Mbo I酶檢測]
1．準備1.5ml小試管4個；每管內含有：
基因組DNA（在TE或水中） 10.0μg
10×Mbo I緩沖液 2.5μl
H2O 12.0μl
2．向每管中分別加入：0.1，0.5，1或2單位的Mbo I酶。
3．37℃保溫到5，10，20，40分鐘后，分別從每管中移出6μl，在干冰中貯存到下一步時一并使用。
4．把16個樣品在瓊脂糖凝膠中進行電泳，并與標準分子量進行比較。
5．選擇參數為：能產生平均大小約20kb的時間和Mbo I的濃度。
[Mbo I酶切]
1．根據上述酶切檢測結果，選用最佳酶切條件，并把酶的量加大100倍，用以消化1mg的基因組DNA；取1個10~15ml的塑料管，加入：
含1mg基因組DNA 1.0ml
Mbo I 按所測定的量加
10×Mbo I緩沖液 250.0μl
H2O 1.2ml
按前述（5）中所測定出的時間（產生20kb）于37℃保溫。
2．用2.5ml 1：1酚和氯仿混合物抽提DNA.
3．把上層水相移入一新管中，加275μl 5M的NaCl。
4．加7ml乙醇，置冰水浴中沉淀10分鐘。
5．4℃，12 000g離心10分鐘。
6．倒除乙醇，重懸DNA于500μl TE緩沖液中，重懸過程在4℃中需數小時。
7．為獲得大小合適的DNA片段，將步驟6中的DNA分作6分（每分約80μl），分別放在含蔗糖梯度密度Beckman Ultra-clear SW41超離心管中，各通過蔗糖梯度密度儀。在含10~40%的蔗糖，20 mM Tris（pH7.4），10mM EDTA，1M NaCl等濃度中形成線性梯度。
8．135 000g 20℃離心16小時。
次日
9．用粗針頭在每一管的底部刺一小孔（依次收集6管中的DNA）每管按12滴（350~500μl）作為一分收集入a, b, c…數管中，然后再收集第二管、第三管等依次并入a, b, c各管中。
10． 從每分中都取10μl樣品加10μl水稀釋、4μl載樣緩沖液、用0.4%瓊脂糖凝膠電泳，然后與Hind Ⅲ酶切的λDNA標準分子量作比較，以確定那一分中所含片段為10~20kb大小。
11． 將含有16~20kb片段的管子并在一起，加2.5倍體積的乙醇，-20℃冷凍數小時。
第三天
12．10 000g 4℃離心10分鐘，收集DNA。
13．棄上清液，重懸于160μl TE緩沖液中。
14．對大小合適的片段（16~20kb）再按8~13重復梯度分離，但此次只用兩個管子即可；每管中各用80μl DNA。第二次蔗糖梯度分離后，將沉淀的DNA懸浮在50μl TE緩沖液中。
第四天
15．取2.5μl樣品（用溴化乙錠染色），與已知濃度和片段大小的DNA片段在瓊脂糖凝膠中電泳后，比較兩者染色強度，估算出DNA濃度，并確證所制備出插入片段的不同大小。
16．把樣品DNA濃度調到0.25μl/ml，-20℃貯存備用。
二）用于基因克隆載體DNA（噬菌體DNA）的制備
1. 用BamH I酶切EMBL3 DNA，加：
EBML3 DNA(500μg) 500μl
10×BamH I緩沖液 100μl
BamH I (10U/μl) 100μl
H2O 300μl
2. 于37℃保溫2小時。
3. 每管中加1體積（500μl）SS-酚和氯仿（1：1）混合物。充分混勻，于微型離心機中離心2分鐘以分離兩相，吸取上清水相至新管。
4. 在每管中加500μl氯仿，充分混勻，離心2分鐘，分相。
5. 吸水相轉入新管。
6. 在各試管中加50μl 5M NaCl，再加1ml乙醇。冰水浴中冷卻10分鐘。
7. 在微型離心機中4℃離心5分鐘。
8. 棄去上清液，加1ml 80%乙醇洗滌沉淀物，離心棄去液體。
9. DNA沉淀物真空干燥。
10. 用500μl TE緩沖液溶解沉淀物。
11. EcoR I酶切EBML3 DNA，加：
從步驟10中所獲DNA 500μl
10×EcoR I緩沖液 100μl
EcoR I (1 000U) 100μl
H2O 300μl
12. 于37℃保溫4小時。
13. 按3-9抽提、沉淀并回收。
14. 用500μl TE緩沖液溶解沉淀物。
15. 異丙醇沉淀：在步驟14中得到的500μl DNA于1.5ml離心管中加：3M 醋酸鈉（pH6.0）75μl，異丙醇（在1.5ml微型離心管中）300μl。
16. 冰水浴中置15分鐘。
17. 在微型離心機中4℃離心10分鐘。
18. 棄上清液，用200μl 0.35M醋酸鈉和乙醇（1：2.5）溶液洗滌沉淀物。
19. 在微型離心機中4℃離心10分鐘。
20. 重復步驟18和19。
21.