一、材料和試劑
1. DE32或DE52纖維素。
2. HCl；NaOH；0.01～0.05 mol/L，pH8.0 PB；0.01 mol/L，pH8.6 Tris-Cl；0.5 mol/L NaCl。
3. 待純化標本：雜交瘤腹水或培養上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。
4. 1.5x50 cm 層析柱；透析袋；紫外分光光度計及其他透析和層析所需的試劑和器材。
二、操作步驟
1. DE52纖維素的處理：DE52經酸、堿處理，0.01 mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。
2. 裝柱：將層析柱固定于滴定架上，柱底墊一圓形尼龍紗，出口接一細塑料管并關閉出水。將浸泡于0.01 mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中，待DE52自然沉降3～5 cm高時，吸除0.01 mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或松開出水口螺旋夾，控制流速1～2 ml/min，同時連續加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后，柱面放一圓形濾紙片。
3. 平衡：松開出水口螺旋夾，以0.01 mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速為15滴/min，待流出液與洗脫液之pH值達到一致時，停止平衡。
4. 待提取樣品的準備：將蛋白裝入透析袋里，置4℃冰箱，對0.01 mol/L pH8.6 Tris-Cl透析過夜。
5. 加樣、洗脫與收集：用吸管吸去柱面液體，以毛細吸管沿柱壁加入樣品，樣品體積相當于柱床體積的1%～2%，蛋白濃度為50～70 mg。啟開出水口螺旋夾使樣品緩慢進入柱床內，并用少量洗脫液清洗柱壁；待液體進入柱床后，以0.01 mol/L，pH8.6 Tris-Cl洗脫，控制流速為14～16滴/min。分部收集器收集，紫外監測，或人工收集，以紫外分光光度計分別測定每管280 nm OD值，描繪洗脫液峰。
6. 濃縮：將洗脫液的280 nm OD上峰段與下峰段各管分別合并，裝入透析袋，以PEG濃縮至所需體積。 展開 | 